过敏性鼻炎(Allergic Rhinitis，AR)又叫变应性鼻炎，是最常见的过敏性疾病之一，在全球的发病率为10%～25%^[1]，在中医属于鼻鼽的范畴，以突然和反复发作的鼻痒、鼻塞、喷嚏、流清涕为特征^{[2, 3]}，大多数医家认为本病是肺脾肾三脏虚损，风寒异气之邪乘袭^[4]。西医对过敏性鼻炎的治疗主要是对症治疗，常用药物为抗组胺药、减充血剂、抗胆碱药、糖皮质类固醇激素、肥大细胞膜稳定剂、白三烯受体拮抗剂等^{[5, 6, 7]}。中医药辨证治疗过敏性鼻炎具有远期疗效稳定，复发率低等特点，标本兼治，从根本上治愈疾病^[8]。

芪防鼻敏方是临床经验方，全方由黄芪、桂枝、白芍等12味药组成，具有健脾益肺，温阳固表，宣通鼻窍之效，用于肺脾两虚，胃阳不固，肺窍不利所致的鼻鼽，症见喷嚏、鼻塞、鼻痒、流清涕，畏寒恶风，动则喘乏，食少便溏；过敏性鼻炎见上述症状者。长期以汤药及配方颗粒形式用于治疗过敏性鼻炎，且具有较好的疗效。该方重用黄芪补脾益肺、实卫固表为君药；药理研究表明黄芪具有类激素样和免疫促进作用，提高机体免疫力，减少疾病复发^[9]；桂枝、白芍调和营卫，发表解肌为臣药。本研究结合颗粒剂性质稳定、生物利用度高、便于工业化生产和携带服用方便的优点，拟将其制成颗粒剂，为过敏性鼻炎患者提供一种新的中成药。根据处方中药物所含化学成分的理化性质及药理作用，采用正交实验法，以黄芪甲苷、芍药苷为指标，优选芪防鼻敏颗粒的水提醇沉工艺。

岛津LC-20AT高效液相色谱仪(日本岛津公司；Agilent1100 型高效液相色谱仪(美国Agilent 公司) ，2000ES蒸发光散射检测器( 奥泰公司)； BT125D型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；ZDHW型调温电热套(北京市中兴伟业仪器有限公司)；KQ3200DE型数控超声波清洗器(江苏省昆山市超声仪器有限公司)；DZ-28BC型真空干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司)；HH-4型恒温水浴锅(国华电器有限公司)。

黄芪甲苷(中国药品生物制品检定研究院，批号:110781-201314)；芍药苷(月旭材料科技(上海)有限公司，批号:23180-57-6)；黄芪、白芍等饮片均购自北京同仁堂饮片有限责任公司，经检验符合《中华人民共和国药典》(2010版)标准，甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

安捷伦Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，乙腈-水(30∶70)为流动相，流速1.0 mL/min，柱温25 ℃，蒸发光散射检测器(ELSD)参数:漂移管温度100 ℃，载气(压缩空气)流速2.7 L/min，进样量10 μL(图1)。

A:芍药苷对照品；B:供试品；C:阴性样品 图1 黄芪甲苷液相色谱图 Fig.1 HPLC chromatograms of astragaloside IV

图选项

精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成浓度为0.513 g/L的溶液，即得。

取干膏适量，粉碎成细粉，精密称定，加水50 mL超声使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4次，每次50 mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次50 mL，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.22 μm)滤过，取续滤液即得。

按处方比例及制备工艺制备不含黄芪的干膏，按照2.1.3供试品制备方法制备样品即得阴性对照液。

Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，甲醇-0.1%磷酸溶液(21∶79)为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长230 nm，柱温30 ℃，进样量5 μL(图2)。

图2 芍药苷液相色谱图 Fig.2 HPLC chromatograms of paeoniflorin

图选项

精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成浓度为0.042 96 mg/mL的溶液，即得。

取干膏适量，粉碎成细粉，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇35 mL，超声处理(功率150 W，频率40 KHz)30 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液过0.22 μm微孔滤膜滤过即得。

按处方比例及制备工艺制备不含白芍的干膏，按照2.2.3供试品制备方法制备样品即得阴性对照液。

通过预实验研究参考相关文献^{[10, 11, 12, 13]}，选取加水倍量、提取时间、提取次数为影响因素，以黄芪甲苷提取率、芍药苷提取率、干膏得率为考察指标优选最佳水提工艺，因素水平见表1。

按处方比例称取黄芪、白芍等药材共9份，按L9(34)正交表进行水煎煮提取，提取液滤过，浓缩，真空干燥(65 ℃，-0.08 MPa)至恒重，精密称定重量，计算干膏得率。按照2.1.3、2.2.3供试品制备方法制备供试品，分别测定其中黄芪甲苷、芍药苷的提取率。

采用多指标综合评分法^[14]，以各指标提取率最大值为参照，将数据归一化分析，根据处方配比，黄芪(X)的权重系数为7/9，白芍(Y)的权重系数为2/9，综合评分(M)=(7X/9×74.93+2Y/9×79.47)×100。正交实验结果见表2，方差分析结果见表3。

以综合评分为标准，直观分析表明，各因素影响大小顺序为C>A>B>D，最佳提取组合为A3B2C3，即药材加12倍量水煎煮3次，每次1.5 h；方差分析表明，提取次数C具有显著性差异，其余影响因素均无显著性差异，故确定水提取工艺为A3B2C3，即12倍量水，提取3次，每次1.5 h。

为进一步考察最佳提取工艺的稳定性与可靠性，按处方比例称取药材3份，按最佳提取工艺进行验证实验，操作方法同前述，测定黄芪甲苷、芍药苷提取率，结果见表4。

结果表明，验证实验结果与正交表中最优实验组结果相当，说明该提取工艺稳定可行。

影响醇沉的主要因素有药液浓缩相对密度、醇浓度，查阅相关文献显示，黄芪、白芍等药的水提液醇沉浓度多为60%^{[15, 16]}。以黄芪甲苷、芍药苷转移率为指标，考察相对密度对60%醇沉工艺的影响。按处方称取药材以最佳提取工艺提取，药液浓缩至相对密度分别为(60 ℃)1.05~1.10、1.10~1.15 、1.15～1.20左右，加入乙醇至60%，冷藏静置过夜，减压过滤，上清液浓缩得干浸膏，按照2.1.3、2.2.3供试品制备方法制备供试品，分别测定其中黄芪甲苷、芍药苷的转移率。

通过综合评分法直观分析醇沉最佳相对密度为1.15～1.20(60 ℃)，在此条件下黄芪甲苷、芍药苷均有较高的转移率，故确定最佳醇沉工艺为提取液浓缩至相对密度1.15~1.20(60 ℃)，醇沉浓度为60%，冷藏静置过夜。相对密度对醇沉工艺影响实验结果见表5。

称取处方量药材，按照最优水提醇沉工艺验证3批，验证结果见表6，与醇沉实验最优实验比较，说明该醇沉工艺稳定可行。

处方中药味较多，成分复杂，若以单一成分为评价指标优选最优提取条件，不能保证其整体质量，故本实验以君药黄芪的主要有效成分黄芪甲苷、臣药白芍主要有效成分芍药苷为综合评价指标，考察芪防鼻敏颗粒的最优水提醇沉工艺，使其更具有代表性、全面性。

确定的水提醇沉条件与文献^{[15, 16, 17, 18]}基本一致。

实验采用正交实验，以黄芪甲苷、芍药苷提取率综合评分为指标，优选出芪防鼻敏颗粒的最优水提醇沉工艺，验证实验表明，该工艺稳定可行，可用于指导制剂生产。