胃力康颗粒由柴胡、赤芍、枳壳、木香、丹参、延胡索、大黄、甘草等12味药材组成^{[1, 2]}，具有行气活血，泄热和胃的功效，适用于胃脘疼痛、胀闷、泛酸、灼热、嗳气、暴躁易怒、口干口苦等症^{[3, 4, 5, 6]}。作为临床常用中药^{[7, 8, 9, 10]}，胃力康颗粒化学成分复杂，现行标准仅以芍药苷^[11]作为其质量控制指标难以全面、客观的反映药品的内在质量。本研究采用超高效液相色谱法^{[12, 13, 14]}，以芍药苷为内参物，建立胃力康颗粒中7种成分（芍药苷、芦丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、甘草酸）同时测定的“一测多评法”，可快速、全面、准确的控制其产品质量。

Waters Aquity超高效液相色谱仪（美国Waters公司）；AX205型十万分之一天平（瑞士Nettler Toledo公司）；Nilli－Q超纯水制备仪（Nillipore公司）；Tomos 2－16 A型高速离心机（上海托莫斯科学仪器有限公司）；SB－1000YDTD超声清洗槽（宁波新芝生物科技有限公司）。

甲醇为色谱纯，购自Fisher公司；超纯水为Milli-Q制备；芍药苷（批号110736－200731）、芦丁（批号11022LD01）、柚皮苷（批号110722－200610）购自中国药品生物制品检定所；迷迭香酸（批号20140722）、丹酚酸B（批号：20121033）、大黄素－8－O－β－D－葡萄糖苷（批号W14－7－0）、甘草酸（批号20121098）购自天津一方科技有限公司。

胃力康颗粒购自四川绿叶宝光药业股份有限公司，共10个批次。

色谱柱为Waters Aquity UPLC BEH C18柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流动相为甲醇（A）－0.1％甲酸水溶液（B），梯度洗脱，洗脱程序为0～2 min，3% A；2～11 min，3%～36% A；11～13.5 min，36%～41% A；13.5～17 min，41%～54% A，17～18 min，54%～62% A；18～23 min，62%～80% A；23～24 min，80%～3% A；流速0.4 mL/min；检测波长为254 nm；柱温30 ℃；进样量3 μL。

精密称取芍药苷、丹酚酸B对照品各5 mg，用甲醇分别配制成终浓度为5 g/L对照品溶液；精密称取芦丁、柚皮苷、迷迭香酸、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品各2.5 mg，用甲醇分别配制成终浓度为2.5 g/L对照品溶液。精密称取甘草酸对照品2.5 mg，用50%的甲醇溶液配制成终浓度为2.5 g/L对照品溶液，所有对照品溶液储存于4 ℃冰箱备用。

精密量取上述各对照品溶液适量，用甲醇配制成芍药苷、丹酚酸B 为500 mg/L和芦丁、柚皮苷、迷迭香酸、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、甘草酸为250 mg/L的混合对照品溶液。

精密称定胃力康颗粒样品0.20 g置10 mL容量瓶中，加入纯水定容至刻度，超声15 min，冷却，用纯水补足溶液至刻度，摇匀，取1 mL该溶液，14 000 r/min离心10 min，取上清用于分析。

精密量取上述混合照品溶液，用甲醇稀释2、5、10、25、50、125、250倍得7个浓度的混合对照品溶液，取各个浓度上述溶液，进样3 μL分析，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，结果见表1。在该色谱条件下，芍药苷、芦丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和甘草酸的最低检测限分别为0.67、0.33、0.33、0.33、0.67、0.33、0.33 mg/L，最低定量限分别为1、0.5、0.5、0.5、1、0.5、0.5mg/L。胃力康颗粒样品及混合对照品UPLC色谱图见图1。

图1 胃力康颗粒样品(A) 和混合对照品(B) UPLC色谱图 Fig.1 The UPLC chromatogramof Weilikang granules (A) and standard solution (B)

图选项

取胃力康颗粒（批号1304021），按“2.3”项下方法制备供试品溶液，连续进样6针，以各色谱峰峰面积值计算相对标准偏差，结果芍药苷、芦丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和甘草酸的峰面积RSD值分别为0.22%、0.25%、1.34%、1.34%、0.32%、0.33%和0.20%，表明方法精密度良好。

取同一批号胃力康颗粒（批号1304021），按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液并进行测定。计算得芍药苷、芦丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和甘草酸的RSD分别为0.60%，0.95%，2.02%，1.85%，0.58%，1.65%，和0.77%，表明方法重复性良好。

取同一批胃力康颗粒样品（批号1304021）制备的供试品溶液，分别于室温条件下放置0、2、4、6、8、24 h进行测定，芍药苷、芦丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和甘草酸的峰面积RSD值分别为0.99%，1.38%，1.09%，0.80%，0.38%，1.04%，0.66%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

取已知含量的胃力康颗粒样品（批号1304021）0.1 g 共6份，分别精密加入一定量的各对照品溶液，氮气吹干。按“2.3”项下方法制备溶液，进行测定。计算芍药苷、芦丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹参酚B、大黄素-8-O-β-D吡喃葡萄糖苷、甘草酸的加样回收率和RSD值，结果见表2。

相对校正因子（RCF）计算公式为f_si=（A_s/C_s）/（A_i/C_i），其中A_s、C_s分别为内参物对照品s的峰面积和浓度，A_i、C_i分别为待测成分对照品i的峰面积和浓度^{[15, 16, 17, 18]}。

依次进样分析各浓度的混合对照品溶液3 μL，测得各成分色谱峰峰面积。以芍药苷为内参物，计算芦丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和甘草酸的相对校正因子，结果分别为0.072、0.336、0.124、0.108、0.872、0.175，RSD值分别为0.35%、1.28%、1.16%、0.17%、0.25%、0.14%。

采用Waters Aquity UPLC和Agilent 1290 Infinity两个品牌的超高效液相色谱仪及CORTECS UPLC C18和ACQUITY UPLC BEH C18两种色谱柱测定RCF和相对保留时间（RRT）。取“2.2”项下混合对照品溶液，用甲醇稀释得7个浓度的混合对照品溶液，进样3 μL，测定芍药苷、芦丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、甘草酸的峰面积。以芍药苷为内参物计算芦丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、甘草酸RCF值和RRT值，结果见表3和表4。结果表明使用不同超高效液相色谱仪和不同色谱柱，各成分相对于芍药苷的RCF值和RRT值的RSD均小于5%，说明该方法重现性较好。

取10批胃力康颗粒，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取各供试品溶液3 μL，进样测定。采用外标法和一测多评法计算样品中芦丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、甘草酸的含量，结果见表5。结果表明一测多评法与外标法测得的各批次胃力康颗粒样品中7种成分含量的结果相对偏差＜2%，两种测定方法所得结果无明显差异，一测多评法可用于胃力康颗粒的质量控制。

实验结果表明，采用甲醇-水体系时，胃力康颗粒中各个成分分离度较差，加入甲酸后各色谱峰分离度明显改善，且甲醇-0.1%甲酸水体系分离效果最好。并考察了乙腈-0.1%甲酸水、甲醇-0.1%甲酸水作为流动相，发现流动相中的有机相选用甲醇的分离效果比乙腈好。最终采用甲醇-0.1%甲酸水作为实验的流动相。在方法建立过程中，分别考察了采用HPLC、UPLC建立检测胃力康颗粒中7种主要成分的分析方法。结果表明，HPLC所需检测时间较长（120 min），而UPLC仅需24 min即可完成检测，极大的提高了检测效率。本研究以芍药苷为内参物，建立了能同时测定胃立康颗粒中芍药苷、芦丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和甘草酸7种有效成分的一测多评法，与现有检测方法比较^{[19, 20]}，能够更加快速、全面、准确的控制胃力康颗粒的药品质量。

胃力康颗粒由柴胡、赤芍、枳壳、木香、丹参、延胡索、大黄、甘草等12味药材组成^{[1, 2]}，具有行气活血，泄热和胃的功效，适用于胃脘疼痛、胀闷、泛酸、灼热、嗳气、暴躁易怒、口干口苦等症^{[3, 4, 5, 6]}。作为临床常用中药^{[7, 8, 9, 10]}，胃力康颗粒化学成分复杂，现行标准仅以芍药苷^[11]作为其质量控制指标难以全面、客观的反映药品的内在质量。本研究采用超高效液相色谱法^{[12, 13, 14]}，以芍药苷为内参物，建立胃力康颗粒中7种成分（芍药苷、芦丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、甘草酸）同时测定的“一测多评法”，可快速、全面、准确的控制其产品质量。