补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实，具有治疗肾阳不足、阳痿遗精、遗尿尿频、腰膝冷痛、肾虚作喘、五更泄泻，外用治白癜风、斑秃的功效^[1]。补骨脂酚是补骨脂中主要的有效成分^[2]，具有抗癌^[3]、降糖降血脂^{[4, 5]}、抗炎^{[6, 7, 8]}、抗衰老^[9]、抗菌^{[10, 11, 12, 13, 14, 15]}、抗抑郁^[16]、抗氧化和肝脏保护^{[17, 18]}等多种药理活性。

如何快速制备大量的补骨脂酚是工业生产中密切关注的问题，本研究建立了一种补骨脂酚的制备方法：补骨脂药材粉碎，经石油醚冷浸提取，回收溶剂，得到补骨脂酚粗提物；经硅胶柱色谱分离，石油醚洗脱得到补骨脂酚粗品；再进一步经石油醚-乙酸乙酯（12∶1）洗脱得到补骨脂酚纯品。该方法具有高效率、低成本、所用溶剂毒性低等优点。

补骨脂药材购自河南，经天津中医药大学李天祥副教授鉴定为豆科植物补骨脂（Psoralea corylifolia L.）的干燥成熟果实，样品储存于天津国际生物医药联合研究院中药新药研发中心；薄层层析硅胶GF-254、柱层析硅胶（青岛海洋化工厂）；石油醚（沸程60~90 ℃）；乙酸乙酯（天津市风船化学试剂科技有限公司）；甲醇（美国Sigma-Aldrich公司）。

ACQUITY超高效液相色谱仪（美国Waters公司，包括Waters ACQUITY二元泵、DAD检测器、自动进样器、在线脱气机、柱温箱、Empower色谱工作站）；MILLI-Q超纯水仪（美国Millipore公司）；Bruker AV Ⅲ 400 MHz核磁共振波谱仪（瑞士Bruker公司）；SHZ-D（Ⅲ） 循环水式多用真空泵；DLSB-5/20型低温冷却液循环泵（天津科诺仪器设备有限公司）；RE-52A旋转蒸发仪（巩义市英峪予华仪器厂）；ZF-20D暗箱式紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）；AL 204万分之一天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）；ACS-30型电子计价秤（上海花潮电器有限公司）。

本研究中，为了提高补骨脂酚的得率，简化制备工艺，提高制备效率，系统考察了不同体积石油醚、提取时间、提取次数等影响因素。提取补骨脂酚的影响因素考察见表1。

经不同提取工艺制备的补骨脂酚粗提物，分别加石油醚溶解，硅胶（200~300目）拌样，补骨脂酚粗提物、石油醚体积、硅胶质量比为100∶50∶120（g/mL/g）。

石油醚和硅胶（100~200目）按体积质量比5∶1（mL/g）装柱，将补骨脂酚粗提物样品进行硅胶柱层析分离，石油醚洗脱，每2.5 L为1个流份，共收集4个流份，经TLC跟踪，合并流份1~3，减压浓缩，得补骨脂酚粗品。

为进一步纯化补骨脂酚粗品，加石油醚溶解，硅胶（200~300目）拌样，其中，补骨脂酚粗品、石油醚体积、硅胶质量比为100∶50∶120（g/mL/g）；石油醚和硅胶（100~200目）按体积质量比5∶1（mL/g）装柱，将补骨脂酚粗品进行硅胶柱层析分离，石油醚-乙酸乙酯（12∶1）洗脱，1 L为1个流份，经TLC跟踪，10%硫酸乙醇显色，合并含有补骨脂酚的流份，减压浓缩，得补骨脂酚纯品。

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18 Rapid Resolution HT （4.6×100 mm,1.8 μm）；甲醇-水（85∶15）等度洗脱；柱温：30 ℃；流速：0.3 mL/min；进样量：2 μL；检测波长：246 nm。

取补骨脂酚3.60 mg，精密称定，置2 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，取适量配成浓度为0.09 mg/mL的供试品溶液，14 000 r/min离心10 min，取上清液，即得。

系统研究了不同体积石油醚、提取时间、提取次数对补骨脂酚得率的影响，结果表明：补骨脂经5倍量石油醚、提取36 h、提取3次得补骨脂提取物140 g，经硅胶柱纯化得到补骨脂酚粗品78 g（经UPLC分析其纯度约30%），得率为7.8%；经10倍量石油醚、提取24 h、提取2次得补骨脂提取物134 g，经硅胶柱纯化得到补骨脂酚粗品77 g（经UPLC分析其纯度约30%），得率为7.7%；经15倍量石油醚、提取12 h、提取1次得补骨脂提取物118 g，经硅胶柱纯化得到补骨脂酚粗品60 g（经UPLC分析其纯度约30%），得率为6.0%。因此，选择5倍量石油醚、提取36 h、提取3次作为补骨脂酚的最佳提取工艺。

合并上述补骨脂酚粗品215 g，进行硅胶柱层析分离，得补骨脂酚纯品30 g，得率为1.0%。通过核磁（1H NMR和13C NMR）数据与文献资料进行比较^[19]，化合物被确证为补骨脂酚，化学结构见图1，经UPLC检测，纯度＞ 98%，见图2，数据如下。

补骨脂酚：淡黄色油状物。

图1 补骨脂酚的化学结构 Fig.1 The chemical structure of Bakuchiol

图选项

图2 补骨脂酚的UPLC色谱图 Fig.2 UPLC chromatograms of Bakuchiol

图选项

¹H NMR (400 MHz,CDCl₃): 7.24 (2H,d,J=8.4 Hz,H-2,6),6.76 (2H,d,J=8.4 Hz,H-3,5),6.25 (1H,d,J=16.4 Hz,H-7),6.05 (1H,d,J=16.4 Hz,H-8),5.89 (1H,dd,J=17.2,10.8 Hz,H-17),5.12 (1H,bt,J=6.8 Hz,H-12),5.04 (1H,dd,J=6.0,1.2 Hz,H-18a),5.00 (1H,dd,J=12.8,1.2 Hz,H-18b),1.95 (2H,dd,J= 17.2,7.6 Hz,H-10),1.67 (3H,s,H-14),1.58 (3H,s,H-15),1.49 (2H,m,H-11),1.19 (3H,s,H-16)。 ¹³C NMR (100 MHz,CDCl³): 154.7 (C-4),146.1 (C-17),136.0 (C-7),131.4 (C-1),131.1 (C-13),127.5 (C-2,6),126.6 (C-8),124.9 (C-12),115.5 (C-3,5),112.0 (C-18),42.7 (C-9),41.4 (C-10),25.8 (C-15),23.5 (C-16),23.4 (C-11),17.8 (C-14)。

本研究建立了一种制备补骨脂酚的方法，该方法具有操作简便，成本低廉，收率稳定等优点，能够大量制备补骨脂酚，适合规模化生产的需要，为补骨脂资源的综合开发利用和产业化奠定了基础。