稳心颗粒是由三七、党参、黄精、甘松和琥珀等组成的复方制剂^[1]，其配伍特点与炙甘草汤一脉相承，具有活血化瘀、行气导滞、益气养阴的功效^[2]。稳心颗粒是目前中国首个通过美国实验室论证，具有多离子通道[钠离子（Na⁺）、钾离子（Ka⁺）、钙离子（Ca²⁺）]调节作用的中成药^[3-4]，能从根本上改善心律失常的原发病^[5-6]，临床将其用于室性早搏的治疗，疗效显著^[7]。方中党参为君药，补中益气，帅血而行，使心脉通而不滞；三七活血化瘀，定惊安神，为佐药^[8]。

2015 年药典记载了稳心颗粒中三七皂苷R₁，人参皂苷Rg₁、Rb₁ 的定量方法。本实验在此研究的基础上，简化实验步骤，引入了两个新定量指标：人参皂苷Rd 与党参炔苷。使得稳心颗粒的定量成分不再局限于三七药材，使得质量标准更加全面。为稳心颗粒的质量控制及后续作用机制研究打下基础。

1 实验材料 1.1 仪器

Agilent1260 DAD 高效液相色谱仪；超纯水仪（Milli-Q，美国Millipore 公司）；十万分之一天平（METTLER TOLEDO XS205，瑞士METTLER公司）；万分之一天平（METTLER TOLEDO AL204，瑞士METTLER公司）；SCIENTZ SB 25-12DTN超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 药品与试剂

稳心颗粒（无蔗糖，每袋5 g由山东步长制药有限公司提供；人参皂苷砸早员（批号110703-201529）、人参皂苷Rb₁（批号110704-201424）、人参皂苷Rd（批号111818-201302）标准品由中国药品生物制品检定所提供，纯度为95%；三七皂苷R₁（批号AB160N）、党参炔苷（批号AB323L）标准品由一方科技公司提供，纯度为98%；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 实验方法 2.1 色谱条件

色谱柱AmethystC₁₈（ 4.6mm×250mm，4μm）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0~14 min，22%~30%A；14~35 min，30%~38%A；35~45 min，38%~38%A；45~47 min，38%~95%A；47~62 min，95%~95%A；62~65 min，95%~22%A）；流速1mL/min；检测波长210 nm；柱温27℃。

2.2 对照品溶液的制备

取三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、Rb₁、Rd 和党参炔苷适量，精密称定，加甲醇配制成每1mL含有三七皂苷R₁ 0.247mg、人参皂苷Rg₁0.422 mg、党参炔苷0.042 mg、人参皂苷Rb₁ 0.847 mg和人参皂苷Rd 0.255 mg的混合溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取装量差异项下的本品，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水饱和的正丁醇50 mL，密塞，称定质量，浸泡12 h，超声处理（功率300 W，频率40 kHz）1 h，放冷，再称定质量，用水饱和的正丁醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 专属性实验

按处方中药味的比例，分别去除三七与党参，制成缺三七与党参的阴性样品，按“2.3”项下方法制备阴性对照溶液测定，结果在三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、Rb₁、Rd 与党参炔苷相同保留时间处未显明显色谱峰，故认为无干扰，见图 1。

2.5 线性关系考察

将混合对照品溶液稀释0、2、4、8、16、32 倍，分别注入液相色谱仪，分别计算同一保留时间下的峰面积，以浓度X 为横坐标，以峰面积Y 为纵坐标绘制标准曲线。回归方程：三七皂苷R₁：Y=984.18X-0.546 3，r=0.999 9，对照品在8~247 mg/L线性关系良好；人参皂苷Rg₁：Y=1 298.9X+6.829 2，r=0.999 9，对照品在14~422 mg/L 线性关系良好；党参炔苷：Y=38 187X-16.383，r=0.999 9，对照品在1.5~42 mg/L线性关系良好；人参皂苷Rb₁：Y=441.49X-1.838 8，r=0.999 9，对照品在26.5~847 mg/L线性关系良好；人参皂苷Rd：Y=1009.8X+1.3961，r=0.9996，对照品在8~255 mg/L线性关系良好。

2.6 精密度实验

精密吸取同一供试品溶液（批号1412042），进样10 μL，重复进样6 次，测定峰面积。三七皂苷R₁ 的RSD=1.61%，人参皂苷Rg1 的RSD=0.32%，党参炔苷的RSD=1.41%，人参皂苷Rb₁ 的RSD=0.60%，人参皂苷Rd 的RSD=1.37%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性实验

精密吸取同一供试品溶液（批号1412042），在室温下保存，分别于0、1、2、4、8、12、24、48 h的时间间隔，精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。三七皂苷R₁ 的RSD=1.56%，人参皂苷Rg₁的RSD=0.46%，党参炔苷的RSD=0.94%，人参皂苷Rb₁的RSD=0.82%，人参皂苷Rd 的RSD=1.21%，表明供试品溶液在48 h内基本稳定。

2.8 重现性实验

按前述供试品溶液制备方法制备，对同一批样品（批号1412042）取6 份进行测定。三七皂苷R₁的RSD=1.06%，人参皂苷Rg1 的RSD=1.34%，党参炔苷的RSD=0.54%，人参皂苷Rb₁ 的RSD=1.10%，人参皂苷Rd 的RSD=1.67%，表明方法的重现性良好。

2.9 加样回收率实验

取已知含量的稳心颗粒样品（批号1412042，三七皂苷R1 0.829 7 mg/g，人参皂苷Rg1 3.307 2 mg/g，党参炔苷0.089 7 mg/g 人参皂苷Rb1 5.464 3 mg/g，人参皂苷Rd 0.787 4 mg/g）约0.5g，精密称定6份，加入与样品中各成分含有量相当的对照品的溶液，按“2.3”项下方法制备供试溶液，依法测定峰面积并计算回收率。三七皂苷R₁、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd 与党参炔苷的回收率RSD 分别为2.74%、1.85%、1.94%、1.96%与2.49%，表明本测定方法的回收率良好。2.10 样品测定按上述色谱条件对6 批样品进行测定，三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、Rb₁、Rd 与党参炔苷的含量测定结果，见表 1。

3 讨论

本实验参照2015 版《中国药典》方法，为最大限度防止定量成分损失，精简实验方法，将药典关于稳心颗粒的定量方法改进为“2.3”项下供试品制备方法。进而确定稳心颗粒的定量成分：三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、Rb₁、Rd与党参炔苷。以上4 类皂苷成分归属于三七药材^[9]，党参炔苷为党参中的化学成分^[10]。据文献报道，三七可以通过缩短钙通道的开放时间，延长关闭时间，从而促进心律失常的恢复^[11]。党参提取物能在不增加心率的情况下提高心排血量，增加脑、内脏和下肢的血液量以及循环量^[12]。党参炔苷具有抗肿瘤、抗菌、抗炎、镇静、降压作用，还能调节前列腺素代谢，亦可作为质量控制的指标性成分^[13]。本实验方法简便易操作，稳定性良好，为稳心颗粒的后续研究奠定了良好的基础。