胃溃疡是一种临床常见病，以腹胀、呕吐、反酸和节律性的上腹部疼痛为主要临床表现，具有发病率及复发率高的特点^[1]。治疗不当常引发各类并发症如溃疡出血、溃疡穿孔、幽门梗阻和胃溃疡的癌变等^[2]。对患者的生活乃至生命产生巨大的威胁。按照胃溃疡的发病原因可分为应激性胃溃疡和慢性胃溃疡。其中应激性溃疡（SU）是指机体在重创、危重疾病或严重心理障碍等刺激下出现的胃肠道糜烂和溃疡^[3-4]。本实验通过建立应激性胃溃疡模型研究不同剂量的吴茱萸对应激性胃溃疡的作用及其可能的作用机制。

1 材料方法 1.1 药物与试剂

吴茱萸饮片购自天津本地药房，经实验室王跃飞老师鉴定合格。吴茱萸提取物：称取吴茱萸药材210 g，每次加水16倍量，煎煮3次，每次0.5h，过滤，合并滤液，减压浓缩，真空干燥，得到吴茱萸提取物干膏，平行操作三份，平均出膏率为42.8%。使用时用蒸馏水配制。4%的多聚甲醛（天津索来宝科技有限公司）、水合氯醛（天津市科密欧化学试剂有限公司）、高氯酸（天津市康科德科技有限公司）、乙腈为色谱纯、磷酸二氢钠、辛烷磺酸钠、三乙胺、EDTA均为分析纯。

1.2 仪器

美国Angilent高效液相色谱系统（美国Agilent公司）；Morris水迷宫、台式冷冻离心机-64R（美国Backman公司）。

1.3 动物和分组

健康雄性Wistar大鼠60只，体质量为250~270 g。饲养于天津生物工程研究所，饲养环境温度为23~25 ℃，湿度为50%~60%，光线为12 h明暗循环，标准饲料适应性喂养7 d，自由进食和饮水。应激前禁食不禁水24 h。按照大鼠体质量随机分为5组，每组12只：即空白对照组、模型对照组、吴茱萸0.45 g/kg体质量组、0.9 g/kg体质量组和1.8 g/kg体质量组。吴茱萸不同浓度母液按1 mL/100 g体质量每天1次连续灌胃给药7 d，空白组和模型组动物灌胃给予蒸馏水。在第7次给药后禁食不禁水24 h，对大鼠进行水浸-束缚法建立大鼠应激性胃溃疡模型。

2.2 建立模型

全部过程在室温下进行，应激前禁食24 h，自由饮水。将大鼠分别束缚于大小适当的特制塑料笼内（以不能自由活动为度）。动物头部向上垂直浸泡在温度恒定的温水浴中（23~25 ℃），水深与大鼠剑突部位齐平，浸水5 h后取出。水合氯醛腹腔注射麻醉，沿腹中线开腹，腹主动脉取血备用，离心取血清备用；剥离腹腔其他脏器脂肪后暴露游离胃，结扎贲门后切断胃部贲门端，由十二指肠经幽门向胃内注入4%多聚甲醛固定液5 mL固定10 min，结扎幽门切断幽门端取出整个胃部组织。沿胃大弯将胃剪开并展平，生理盐水轻轻冲洗胃黏膜表面胃内容物，展平胃部组织观察粘膜损伤和溃疡形态，计算溃疡指数。

2.3 溃疡指数（UI）测定

采用评分法间接评分，参照Guth法^[10]测定：黏膜完整为0分；黏膜损伤长度大于1 mm者，每1 mm计1分；2~3 mm之间者计分加倍；3~4 mm者，计分按3倍计，以此类推，计分相加即为溃疡指数。

2.4 E测定的样品制备

腹腔动脉取血后37 ℃水浴1 h，离心取上层澄清血清备用。取20个1.5 mL离心管，根据各组织质量，每管加入50 μL高氯酸和50 μL血清，微型旋涡混合仪震荡，混匀。超速离心机离心（10 000转，5 min）后取出，取50 μL上清液置于1.5 mL离心管中，加入950 μL的超纯水，微型旋涡混合仪震荡，混匀。冰箱保存，用于E的测定。

2.5 流动相的制备

取磷酸二氢钠（单水）10.35 g，辛烷磺酸钠0.368 g，三乙胺100 μL，250 μL 100 mmol/L EDTA，100 mL色谱纯乙腈，加入色谱纯水（≥18 MΩ）定容至1 000 mL。调节pH至3.00。过滤，超声脱气。

2.6 HPLC-ECD法条件

色谱柱：SymmetryShieldTM RP18 Column (150 mm×3.2 mm，3 μmol/L)，ESA公司，美国；流速：0.6 mL/min；柱温：30 ℃；ECD保护电极电压300 mV，工作电极通道1电压为0 mV，量程范围0~100 nA；工作电极通道2电压为+300 mV，量程范围0~100 nA；进样量：10 μL。

2.7 统计学处理

全部实验数据均采用SPSS 11.5分析软件对数据进行统计分析, 采用单因素方差分析，P < 0.05结果显示差异具有统计学意义。

3 结果 3.1 大鼠胃的形态学观察

如图 1所示，正常对照组大鼠胃部呈现健康肉粉色，胃粘膜表面光滑完整，可见生理性黏膜皱襞，无损伤性改变。模型组胃部组织呈现弥漫性水肿，粘膜表面散在多发黏膜出血和血痂，呈块状或条索状。吴茱萸给药三组中，吴茱萸0.45 g/kg组胃黏膜表面较光滑可见少量散在出血点。吴茱萸其余两组对应激性胃溃疡无明显作用。

3.2 各组大鼠胃溃疡指数（UI）测定

如图 2所示，与正常组相比模型组溃疡指数显著上升，差异具有统计学意义（P < 0.01）。给药吴茱萸0.45 g/kg组的溃疡指数比模型组显著降低，差异有统计学意义（P < 0.01），吴茱萸另外两组溃疡指数与模型组比较无明显变化。

3.3 吴茱萸对应激大鼠血清E水平的影响

如图 3所示，与正常对照组比较模型组血清中肾上腺素的含量显著升高，差异有统计学意义（P < 0.01）。吴茱萸0.45 g/kg组和0.9 g/kg组血清中E的含量与模型组比价均显著降低，差异具有统计学意义（P < 0.01或0.05）。

4 讨论

吴茱萸始载于《神农本草经》，为常用温里药^[5]具有疏肝下气、温中散寒、开郁止痛、燥湿助阳的功效。汉代张仲景所著的《伤寒论》中的吴茱萸汤和《丹溪心法·火六》记载的左金丸均以吴茱萸为主药用于治疗胃部疾患^[6]。现代研究表明吴茱萸化学成分种类繁多，包括生物碱类、苦味素类、挥发油、香豆精、甾体、木脂素及多糖等活性成分^[7-8]。现代药理学研究表明吴茱萸具有抗炎、镇痛、抗菌等的药理作用^[9]。杨磊等给予小鼠不同炮制方法的吴茱萸水溶液，通过小鼠热板法、扭体法和耳肿法观察吴茱萸抗炎镇痛作用，实验证实吴茱萸不同炮制品均具有明显的抗炎镇痛作用^[10]。潘岩等通过左金丸及拆方对大鼠胃溃疡的作用表明吴茱萸能够促进损伤黏膜的腺体新生和纤维结缔组织新生，促进肌层增生增厚进而促进溃疡愈合。并且吴茱萸所含生物碱还具有抗幽门螺旋杆菌、降低胃酸浓度的作用^[11-12]。研究表明吴茱萸可以通过抗幽门螺旋杆菌、抗炎等药理作用抗胃溃疡。本研究还发现低剂量的吴茱萸对应激引起的胃黏膜损伤具有显著抑制作用，而随着吴茱萸用药剂量增加，吴茱萸的抗胃溃疡作用消失，提示临床使用吴茱萸治疗胃溃疡时剂量不宜过大。

当机体受到持续的应激刺激时，脑交感神经兴奋性增加，分泌大量单胺类神经递质^[13]。同时副交感神经系统兴奋性升高。引起胃粘膜保护机制受损如胃粘膜微血管痉挛、胃腺体功能受损、胃壁细胞激活等，并伴有胃酸、胃蛋白酶异常分泌，引发胃粘膜受损产生胃溃疡^[14-16]。肾上腺素是儿茶酚胺类的中枢性神经递质^[17]。有报道12.8 μg/mL吴茱萸显著促进牛肾上腺髓质细胞中儿茶酚胺分泌^[18]。这可能是高浓度吴茱萸对应激引起的胃溃疡无显著作用的原因之一。本实验中吴茱萸低剂量组能显著降低应激性胃溃疡大鼠血清中的肾上腺素的含量，其结果与低剂量吴茱萸抗应激性胃溃疡作用是一致，同时提示临床用药时，吴茱萸的使用剂量及时间不宜过大过长，或可与其它药物配伍使用。