阿尔茨海默病(AD)常以遗忘为首发症状，随病情进展出现精神、行为异常等症状。中国AD患者约有600万人^[1]，给社会带来沉重经济负担。突触功能异常是AD重要的发病机制^[2]，与认知损害的关系最密切^[3]。天芪益智颗粒由王永炎验方化裁，以升阳益气，活血通络法治疗痴呆。前期实验证实，该药通过改善氧化应激提高AD模型鼠的学习记忆能力^[4]，本研究拟评价该药对AD模型鼠学习记忆能力及突触功能的影响。

1 实验材料 1.1 动物

SPF级4月龄雄性SD大鼠90只，体质量190~220 g，购于中国食品药品鉴定研究院，许可证号SCXK(京)2014－0013。

1.2 主要药品及试剂

Aβ_1-42(杭州中肽生化有限公司，批号CL-05-00776)，Anti-Synaptophysin抗体、Anti-MAP2抗体、Anti-beta Actin抗体(Abcam)，羊抗兔IgG-HRP(中杉金桥生物技术有限公司)，石杉碱甲(河南太龙药业股份有限公司，批号160601)，天芪益智颗粒由北京中医药大学中药学院提供(批号20140913)。

1.3 主要仪器

DBA-2避暗箱(中国医学科学院药物研究所)，ZS-B/S数字脑立体定位仪(北京众实迪创科技发展有限公司)，5417R高速离心机(Eppendorf)，ELX800酶标仪(BIO-TECK)，BioPhotometer plus分光光度计(Eppendorf)。

2 实验方法 2.1 动物模型制备

大鼠随机分组后，75只大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉后固定于脑立体定位仪上，手术区消毒后沿正中线切开头皮，暴露颅骨，在前囟向右旁开1.4 mm、向后1.4 mm处用颅骨钻钻开颅骨，在开孔处用微量注射器向下进针4 mm后，以1 μL/min速度1 μL注射Aβ_1-42，留针3 min后缓慢出针。缝合切口。15只假手术组大鼠，操作方法同上，侧脑室注射1 μL生理盐水。

2.2 分组及给药

大鼠按照随机数字表法随机分成6组，即模型组，假手术组，天芪益智颗粒高、中、低剂量组和西药组。天芪益智颗粒高、中、低剂量组，给药量为1.07、0.53、0.26 g/kg；西药组灌胃石杉碱甲溶液，给药量为0.02 mg/kg；模型组、假手术组：灌胃生理盐水，连续给药30 d。

2.3 避暗实验

将大鼠头背向洞口放入明室，自由活动3 min后接通电源5 min。训练结束24 h后，再次将大鼠置于测试箱的明室，打开电源，记录大鼠第1次离开安全区的时间(潜伏期)和错误次数。

2.4 Western blot检测Synaptophysin、MAP-2

麻醉大鼠，冰上取脑，称质量后加入RIPA裂解液、蛋白酶抑制剂，冰上匀浆后取上清液。BCA法测定蛋白浓度，蛋白上样后SDS-PAGE电泳、转膜，5%脱脂奶粉封闭液中封闭1.5 h后加入Anti-Synaptophysin抗体、Anti-MAP-2抗体、兔抗鼠β-actin多克隆抗体，4 ℃过夜，洗膜后加入羊抗兔IgG-HRP(1:1 000)，孵育80 min，洗膜后进行ECL显色。

2.5 统计学方法

采用SPSS 21.0软件分析实验数据，用均数±标准差(x±s)表示。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较若方差齐采用LDS法，若方差不齐采用Dunnett’s T3法，P < 0.05为差异有统计学意义。

3 结果 3.1 天芪益智颗粒对AD大鼠行为学影响

与假手术组相比，模型组大鼠避暗实验潜伏期缩短，错误次数增多(P < 0.01)。天芪益智颗粒各剂量组大鼠潜伏期长于模型组(P < 0.01)，错误次数少于模型组(P < 0.01)，见表 1。

3.2 天芪益智颗粒对AD大鼠Synaptophysin、MAP-2表达的影响

模型组与假手术组相比，突触素、MAP-2表达水平减低(P < 0.01)；各治疗组实触素、MAP-2表达多于模型组(P < 0.01)，见图 1、表 2。

4 讨论

AD发病机制复杂，突触异常是AD早期的病理改变之一，Selkoe等人认为突触障碍是AD的使动因素^[5]。AD患者的突触数量^[6]、突触结构发生改变或相关蛋白出现异常时，记忆形成出现障碍，并且这种变化出现在淀粉样斑块形成之前^[7]。

突触素是突触囊泡上含量最丰富的膜蛋白^[8]，参与神经递质的释放和突触囊泡再循环，是反应突触数量、密度和功能的良好指标。与AD患者认知功能障碍有明显相关性。MAP-2是神经元内含量最丰富的微管相关蛋白，是研究神经重塑的标志物。MAP-2除了维持神经元结构，还参与了神经元的生长、分化和可塑性调节，突触的发育与重塑均±赖MAP-2的表达^[9]。病理学证实，AD大鼠海马MAP-2表达明显减少^[10]。本次实验发现，天芪益智颗粒组大鼠突触素与MAP-2的表达高于模型组，提示了天芪益智颗粒改善AD模型鼠行为学异常，可能与其恢复突触囊泡循环，重塑突触形态与结构，恢复突触功能有关。

AD俗称“老年痴呆”，其病机复杂，痰、瘀、虚、毒共同致病。气虚血瘀是发病重要的一环。年老正衰，元气不足，瘀血瘀滞脑窍，神机不灵，发为痴呆。天芪益智颗粒由红芪、红景天组成。两者配伍，共奏益气活血通络之功。红芪有具有抗氧化应激作用^[11]，红景天有改善脑能量代谢，抑制细胞凋亡，改善氧化应激等作用，针对AD有独到的疗效^[12-14]，本次研究发现，天芪益智颗粒能够改善AD大鼠的学习和记忆能力，恢复大鼠的突触功能。AD病机复杂，目前尚无特效药物，针对Aβ的新药研发纷纷陷入困境，而中药往往具有多成分、多靶点等特点，具有独特的优势，为AD提供新的治疗思路。