天津中医药  2017, Vol. 34 Issue (7): 478-481

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吴彤, 郭长青, 张义, 杜宁宇, 张伟, 陈晨, 王彤, 徐菁, 侣思
WU Tong, GUO Chang-qing, ZHANG Yi, DU Ning-yu, ZHANG Wei, CHEN Chen, WANG Tong, XU Jing, LV Si
针刀干预对肌筋膜疼痛综合征模型大鼠5-HT和NE的影响
Effect of acupotomology on 5-HT and NE in rats with myofascial pain syndrome
天津中医药, 2017, 34(7): 478-481
Tianjin Journal of Traditional Chinese Medicine, 2017, 34(7): 478-481
http://dx.doi.org/10.11656/j.issn.1672-1519.2017.07.14

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收稿日期: 2017-04-25
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吴彤, 郭长青, 张义, 杜宁宇, 张伟, 陈晨, 王彤, 徐菁, 侣思. 针刀干预对肌筋膜疼痛综合征模型大鼠5-HT和NE的影响[J]. 天津中医药, 2017, 34(7): 478-481.
WU Tong, GUO Chang-qing, ZHANG Yi, DU Ning-yu, ZHANG Wei, CHEN Chen, WANG Tong, XU Jing, LV Si. Effect of acupotomology on 5-HT and NE in rats with myofascial pain syndrome[J]. Tianjin Journal of Traditional Chinese Medicine, 2017, 34(7): 478-481.
针刀干预对肌筋膜疼痛综合征模型大鼠5-HT和NE的影响
吴彤, 郭长青, 张义, 杜宁宇, 张伟, 陈晨, 王彤, 徐菁, 侣思     
北京中医药大学针灸推拿学院, 北京 100029
收稿日期：2017-04-25
作者简介：吴彤(1990-), 女, 研究生, 主要从事针灸理论与临床研究。
摘要：[目的]观察针刀干预对肌筋膜疼痛综合征模型大鼠血清和触发点局部组织五羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）的影响，探讨针刀治疗肌筋膜疼痛综合征的机制。[方法]将24只大鼠随机分为空白组、模型组、针刀组和注射组，每组6只。采用打击结合离心运动法建立肌筋膜疼痛综合征大鼠模型，造模8周。注射组、针刀组进行相应方法干预。用ELISA法检测各组大鼠血清及触发点局部肌肉组织5-HT、NE的含量，采用SPSS 20.0统计学软件进行统计分析。[结果]与空白组比较，模型组大鼠血清和局部组织5-HT、NE含量显着升高，差异有统计学意义（P < 0.05），注射组大鼠血清和组织中5-HT含量显着升高（P < 0.05）；与模型组比较，注射组大鼠血清5-HT、NE的含量显着下降（P < 0.05），局部肌肉组织5-HT含量与之比较未见统计学差异（P>0.05），NE含量显着下降（P < 0.05）；针刀组大鼠血清和局部肌肉组织5-HT、NE的含量显着下降（P < 0.05）.[结论]肌筋膜疼痛综合征模型大鼠血清和局部组织5-HT、NE含量比正常大鼠显着升高，针刀干预可以降低血清和局部组织5-HT、NE含量，注射利多卡因可以降低血清NE、5-HT及局部组织NE含量；针刀及利多卡因注射对于肌筋膜疼痛综合征的治疗作用可能与其降低血清及局部组织5-HT、NE含量有关；且针刀对于局部组织5-HT的调节作用优于药物注射。
关键词：肌筋膜疼痛综合征    针刀疗法    注射疗法    五羟色胺    去甲肾上腺素    

肌筋膜疼痛综合征(MPS)是一种以慢性软组织源性疼痛且伴有一个或多个触发点为主要特征的一组临床证候群, 是引起软组织疼痛最主要的原因之一。该病属临床常见病，在软组织疼痛患者中所占比例高达20%~95%[1]，在中老年人群中非常多见，随着互联网、电脑和智能终端的普及青年人中也不罕见。“触发点”由美国学者Janet于1942年首次提出，是该病的特征性表现[2]。故临床治疗多针对触发点局部治疗，治疗方法包括局部注射利多卡因注射液、局部注射肉毒毒素、针刀疗法以及手法治疗等[3]。其中，针刀疗法在临床中应用广泛，对MPS触发点疼痛的缓解效果明显[4-9]，且具有疗效持久、副作用小等优点，但其具体治疗机制尚不完全明确。

五羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素(NE)在疼痛的产生中发挥一定作用[10]，是重要的疼痛介质，而临床上发现针刀疗法可显著缓解MPS触发点局部的疼痛，故本研究建立肌筋膜疼痛综合征模型鼠，观察针刀干预对血清及触发点局部的5-HT和NE含量的影响，为针刀治疗肌筋膜疼痛综合症提供一定的实验±据。

1 材料和方法 1.1 实验材料

大鼠5-HT ELISA检测试剂盒、NE ELISA检测试剂盒(Adlitteram Diagnostic Laboratories公司，美国)、Dako REALTM EnVisiontm Detection SystemPeroxidase/DAB+、Rabbit/Mouse(DAK0公司，丹麦)、DSPT-208动物跑台(立泰科技有限公司，杭州)、MDF-U50A超低温冰箱(SANYO公司, 日本)、TB-718生物组织包埋机(樱花公司，日本)、Leica RM2235组织切片机(莱卡公司，德国)、OlymPus bx51显微镜(奥林帕斯公司，美国)、Anymicro DSSTM图像采集系统(江苏琅珈科技有限公司)、Stat Fax2100全自动酶标仪(Awareness Technology公司，美国)、针刀(汉章牌0.40 mm×40 mm针刀, 北京华夏针刀医疗器械厂)。

1.2 实验方法 1.2.1 实验动物及分组

清洁、健康级10周龄雄性SD大鼠24只，体质量300~400 g，按照随机数字表法随机分为4组，每组6只。1) 空白组：正常饲养，不造模，不干预，相同抓取刺激。2) 模型组：造模后，正常饲养，不干预，相同抓取刺激。3) 局部注射组(阳性对照)：造模后，在股内侧肌触发点处，用注射器向紧张带内注射1%利多卡因0.5 mL，每周1次，连续3周。4) 针刀组：造模后，在股内侧肌触发点处，用直径0.4 mm针刀，刀口线方向与肌纤维方向一致，直刺进入紧张带，并纵向切开紧张带1刀，每周1次，连续3周。

1.2.2 造模及检测方法

按照黄强民教授提出的打击结合离心运动法建立触发筋膜疼痛综合征动物模型：将大鼠分别在其右股内侧肌中段偏近侧端作为打击位置标记[11]。先用10%的水合氯醛按3 mL/kg体质量进行腹腔麻醉，麻醉后把大鼠固定在打击器下面的木板上，使打击器从20 cm的高度自由落下打击标记部位。次日让大鼠在-16°的电动跑台上进行持续性下坡跑训练，速度逐渐增至16 m/min，进行90 min的离心运动。运动中使用声音和小棒驱赶，以保证良好的运动效果。每周进行1次造模，连续8周。第8次造模结束后喂养1周。

随机选取3只大鼠予以局部解剖，暴露股四头肌，寻找股四头肌上的触发点：1) 通过指腹明显检查到紧张带以及膨大结节的列为紧张带阳性。2) 膨大结节处肌电图测试，将无刺激情况下电位持续大于30 s小于10 min的作为阳性。3) 当电极插入膨大结节内，能引出局部抽搐时为阳性。4) 对取得的肌肉结节或条索带行组织病理HE染色，显示肌纤维收缩(挛缩)结节、肌纤维宽度不等、炎性浸润、纤维增生时为阳性[12-13]。3只大鼠以上4条均为阳性则表明造模成功。

1.2.3 检测方法

酶联免疫反应(ELISA)检测血清中5-HT、NE含量：造模及分组处理后，禁食12 h，腹主动脉采血1 mL，37 ℃水浴15 min，离心4 000转10 min，分离血清，-20 ℃保存待测。按照检测5-HT和NE的ELISA试剂盒说明书进行操作，于波长450 nm酶标仪上读取各孔的A值。以A值为纵坐标, 相应的标准品含量为横坐标，绘制标准曲线，样品5-HT、NE的含量可据其A值由标准曲线换算出相应的含量。

ELISA检测局部组织中5-HT、NE含量：分离位于股四头肌处的触发点(膨大结节处)，低温生理盐水冲洗后, -70 ℃冰箱保存待测。匀浆处理后，行ELISA检测相应因子，方法同上。

1.2.4 统计方法

采用SPSS 20.0统计软件进行统计分析，数据采用均数±标准差(x±s)表示。多组间比较，若各组数据均符合正态分布，采用单因素方差分析，若数据呈偏态分布，采用Kruskal-wallis H检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果 2.1 造模结果

在连续8周的造模后，随机选取的3只大鼠股四头肌处均可找到触发点。组织病理HE染色，触发点局部组织肌纤维之间可见炎性浸润，以及明显的纤维增生，造模成功。见图 1，图 2。

图 1 空白组大鼠肌肉组织(HE×100) Fig. 1 Muscle tissue of rats in control group(HE Staining ×100)
图选项
图 2 造模组大鼠肌肉组织(HE×100) Fig. 2 Muscle tissue in of rats model group(HE Staining ×100)
图选项
2.2 检测结果 2.2.1 各组大鼠血清5-HT、NE含量

经ELISA方法检测各组大鼠血清中5-HT、NE的含量，与空白组相比，模型组大鼠的5-HT、NE和注射组的5-HT显著升高(P＜0.05)；注射组NE和针刀组的5-HT、NE含量均无统计学差异(P＞0.05)。与模型组比较，针刀组和注射组大鼠5-HT、NE含量均显著下降(P＜0.05)；针刀组和注射组之间无统计学差异(P＞0.05)。见表 1。

表 1 各组大鼠血清中的5-HT、NE含量比较(x±s) Tab. 1 Contents of 5-HT and NE in serum of different groups (x±s)
表选项
2.2.2 局部肌肉组织中5-HT、NE水平

经ELISA检测股四头肌处触发点肌肉组织中5-HT、NE的含量，因测得的含量太低，用“含量的-log值”来进行统计分析。与空白组相比，模型组大鼠5-HT、NE和注射组5-HT含量均显著升高(P＜0.05)；注射组NE或针刀组5-HT、NE无统计学差异(P＞0.05)。与模型组相比，针刀组大鼠5-HT、NE含量和注射组NE均显著下降(P＜0.05)；注射组5-HT含量无统计学差异(P＞0.05)；注射组和针刀组大鼠的NE含量无统计学差异(P＞0.05)。见表 2。

表 2 各组大鼠触发点组织中5-HT、NE含量的-log值比较(x±s) Tab. 2 -Log value of contents of 5-HT and NE in tissue between different groups(x±s)
表选项
3 讨论

肌筋膜疼痛综合征在临床上主要表现为肌肉疼痛，治疗原则是用不同的方法对受累肌肉或肌群牵张或破坏张力带和触发点[14]。近年来国内对针刀疗法治疗肌筋膜疼痛综合征的进行了比较严格的观察，证明这种方法有较好的疗效[15-17]。为了更好地研究其中的作用机制进而推广针刀疗法的应用，本研究采用ELISA法检测针刀治疗后大鼠血清和触发点局部肌肉组织中5-HT、NE含量，并与局部注射利多卡因疗法进行对比，发现针刀干预后血清和组织中5-HT、NE含量均明显下降，注射干预后血清和组织中NE含量明显下降，而5-HT含量只在血清中下降，组织中并未下降。通过与模型组相比，针刀干预可降低5-HT、NE在局部组织和血清中的含量，该效应不低于局部注射利多卡因疗法。这可能是针刀疗法治疗MPS的机制之一。

5-HT和NE均属于单胺类神经递质，对疼痛的影响，在中枢和外周有着不同的作用。在外周尤其是疼痛局部可以加重甚至诱发疼痛[18]，如有研究表明针刀疗法可下降血清中5-HT的含量，从而对腰椎间盘突出症根性神经痛起到局部镇痛作用[19]；在中枢的作用比较复杂，如有研究者发现针刀和电针对中枢5-HT、NE的作用，在不同位置的作用不用[20]。

本研究有针对性的研究局部及外周血清中5-HT、NE的变化，结果提示降低外周血和局部组织中5-HT、NE的含量可能是针刀治疗MPS的机制之一，为临床治疗MPS提供了实验±据。但疼痛的发生机制较为复杂，参与发生和加重的因子繁多，5-HT、NE故为其中的一部分不能完全标志疼痛的缓解或加重，故关于针刀疗法对MPS疼痛的缓解还需要更进一步全面和深入的研究。

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Effect of acupotomology on 5-HT and NE in rats with myofascial pain syndrome
WU Tong, GUO Chang-qing, ZHANG Yi, DU Ning-yu, ZHANG Wei, CHEN Chen, WANG Tong, XU Jing, LV Si     
College of Acupuncture and Moxibustion, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China
Abstract: [Objective] To detect the concentration of 5-HT and NE in peripheral blood and the partial muscle to reveal part of the mechanism of acupuncture therapy treating myofascial pain syndrome. [Methods] The 24 rats were divided randomly and equally into control group, model group, acupunction group and injection group(lidocaine). Then we built the rat model of myofascial pain syndrome by knocking and centrifugal movement for 8 weeks.We tested the concentration of 5-HT and NE by the way of ELISA.At last, we used the program of SPSS 20.0 to do the statistical analysis. [Results] The testing result showed that the 5-HT and NE concentration of model group in the tissue and serum were significantly low than the control group(P < 0.05). And the same difference with the 5-HT of injection group The 5-HT and NE concentration of acupunction group in the tissue and serum were significantly low than the model group(P < 0.05). The NE concentration of injection group in the tissue and serum were significantly low than the model group(P < 0.05), same as the 5-HT concentration of in the serum. But the 5-HT concentration of injection group in the tissue was not significantly different compared with the model group(P>0.05). [Conclusion] The 5-HT and NE concentration in the tissue and serum of the myofascial pain syndrome model rat are significantly low than the normal rat.The acupunction therapy can reduce the 5-HT and NE concentration in the tissue and serum. Injection therapy can reduce the 5-HT concentration in serum and the NE concentration in the tissue and serum. But can not reduce the 5-HT concentration in tissue. So reducing the concentration of 5-HT and NE may be one of the treatment mechanisms of acupunction therapy. And the effect of reducing 5-HT concentration in the tissue of acupunction therapy than that of drug therapy.
Key words: myofascial pain syndrome     acupunction treatment     injection treatment     5-HT     NE