产后恶露不绝指的是产后持续3周以上出现阴道不规则出血，伴血块或坏死蜕膜组织成分血液物质，中医认为，产后恶露不绝多因产后冲任不调，气血不足，气血运行不畅有关，导致瘀血内滞、新血不得归经^[1-2]。血府逐瘀汤临床上可用于治疗血瘀等瘀症的治疗，本实验通过复制大鼠流产模型，观察血府逐瘀胶囊对流产大鼠血流变、血红蛋白、血小板聚集功能的影响，进一步探讨血府逐瘀胶囊对血瘀型产后恶露不绝的治疗作用和机制。

1 材料 1.1 实验药物及试剂

血府逐瘀胶囊药粉由天津宏仁堂药业有限公司提供，砖红色粉末，每袋2.5 kg，批号E03023。益母草膏：棕黑色膏状半流体，广西维威制药有限公司生产，批号160304。米非司酮片：每片25 mg，华润紫竹药业有限公司生产，批号：43160201。米索前列醇片：每片0.2 mg，华润紫竹药业有限公司生产，批号：43160315。胶原诱导剂：1 mL，HELENA，LOT4-16-5368, EXP11-17。ADP诱导剂：1 mL，HELENA，LOT7-16-5366，EXP6-17。CD34抗体：0.1 mL，武汉博士德，批号10CM130。

1.2 实验动物

SD大鼠，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。许可证号：SCXK（京）2012-0001。雄性30只（体质量300~320 g），雌性70只（体质量200~220 g）。动物饲养在具有实验动物使用许可证[许可证号：SYXK（津）2011-0003]的实验环境内，每日供给北京科澳协力饲料有限公司生产的普通鼠全价颗粒饲料，产品许可证号：SCXK（京）2014-0010。

1.3 实验仪器

全自动血球计数器，MEK-6318K，日本光电；血小板聚集仪，AggRAM，海伦娜；血流变仪，LG-R-80（A型），北京世帝科学仪器有限公司；ASP200S自动真空组织脱水机；Leica EG1150H自动生物组织包埋切片机；HMIAS-2000高清晰度数码显微图像分析系统。

2 方法 2.1 造模方法

大鼠适应性饲养1周后，合笼当日的白天，雌鼠与雄鼠临笼摆放，当日下午5时将雌鼠与雄鼠以2:1合笼，次日早晨进行阴道栓和阴道涂片检查，以发现阴道栓或者大鼠精子当天为受孕第1天，连续4 d，剔除4 d后未检出阴道栓或大鼠精子的雌性大鼠，选取10只受孕大鼠作为正常对照组，其他受孕大鼠于受孕第7天分别灌胃米非司酮（8.3 mg/kg，上午8:00）和米索前列醇（0.1 mg/kg，下午5:00），灌胃体积10 mL/kg。给药第1天灌胃米索前列醇后，阴道内置干棉球1个，第2天以阴道有流血判断流产模型的复制成功。给药同时给予流产大鼠冷水浴，并适当断食，制备早孕流产血瘀大鼠模型^[3-5]。

2.2 动物分组

将未流产大鼠作为正常对照组，将流产雌性大鼠按体质量随机分为5组（模型对照组、血府逐瘀高、中、低剂量组、阳性药对照组），每组10只，随机编号，用苦味酸在大鼠不同部位做标记进行区分。

2.3 给药方法

各组大鼠于受孕第8天开始按相应剂量灌胃给药，灌胃相应受试药液10 mL/kg，1次/日，各剂量分别为1.92、0.96、0.48 g药粉/kg（分别相当于临床人用剂量24、12、6倍）。正常对照组、模型对照组灌胃等体积溶媒介质纯净水、阳性药对照组灌胃益母草膏3 mL/kg，相当于临床人用剂量12倍。连续给药7 d。

2.4 观察指标

造模期间观察大鼠生活状态，末次给药后1 h，腹腔注射4.5%戊巴比妥（1 mL/kg）麻醉，腹主动脉取血，部分以肝素1:9抗凝，用于检测血流变指标；部分以3.8%枸橼酸1:9抗凝，用于检测血小板聚集率^[6-7]，另取10 μL用于血球计数检测。解剖子宫，并置于12%中性福尔马林中固定，HE染色及免疫组化法检测CD34抗原。

2.5 统计学方法

使用SPSS 17.0软件进行统计学分析，实验数据用平均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

3 结果 3.1 血府逐瘀胶囊对产后血瘀大鼠存活状态的影响

与正常对照组相比，模型组对照组大鼠发生较大变化，主要表现为少动、精神不振、炸毛、体态偏瘦、部分有稀便。血府逐瘀高、中剂量组及阳性药组较模型组相比，大鼠生存状态有较大改善，趋近于正常组，低剂量组改善不明显。

3.2 血府逐瘀胶囊对产后血瘀大鼠血流变学及血小板聚集功能的影响

模型对照组大鼠与正常对照组相比，全血黏度、血浆黏度显著增加（P < 0.05，P < 0.01）。与模型对照组相比，血府逐瘀胶囊高、中剂量组可明显降低全血高切、低切、血浆黏度（P < 0.05，P < 0.01），从而改善大鼠血液黏浓凝滞的状态。在以ADP及胶原为诱导剂诱导下，模型对照组大鼠与正常对照组相比，血小板聚集率明显增大（P < 0.01），说明模型对照组大鼠血液处于血小板功能亢进及高凝血因子状态。与模型对照组相比，血府逐瘀胶囊高、中剂量组可以不同程度的降低血小板聚集，尤以高剂量组为佳。见表 1及图 1、2。

3.3 血府逐瘀胶囊对产后血瘀大鼠RBC及HGB含量的影响

与正常对照组相比，模型对照组红细胞及血红蛋白含量显著降低（P < 0.05，P < 0.01）。血府逐瘀胶囊高中剂量组可以显著增加模型大鼠RBC及HGB含量（P < 0.05，P < 0.01），能一定程度上改善产后血瘀大鼠血虚的状况。见表 2。

3.4 血府逐瘀胶囊对产后血瘀大鼠子宫MVD的影响

MVD是评估血管生成的指标之一，CD34标记血管内皮细胞的特异性高，在组织有血瘀的情况，经活血化瘀治疗后新生血管改善微循环，HE染色结合免疫组织化学染色标记CD34结果显示空白对照组子宫内膜组织排列好。与空白对照组相比，模型组子宫内膜和内膜下血管数量明显减少。与模型对照组相比，高、中、低及阳性组有不同程度改善，血管数量有所增加，以阳性组和中剂量组较为明显。见图 3。

4 讨论

产后恶露一词源自汉代《金匮要略·妇人产后病脉证治》中“产后七八日，无太阳证，少腹坚痛，此恶露不尽”，提出了产后恶露不尽与产后瘀血内阻兼阳明腑实的证治观点^[8]中医认为，产后恶露不绝发生的机制为冲任为病，气血运行失常所致，其病因主要是气虚、血瘀、血热^[9-11]。产后血室正开，寒邪内侵胞宫与血相结，寒凝血瘀，或七情所伤，气滞血瘀，或气虚运血无力，余血滞留为瘀，或胞衣残留，影响冲任，总之瘀血不去，新血不得归经而出现恶露不绝。

血府逐瘀汤，中医方剂，为理血剂，具有活血化瘀，行气止痛之功效。该方是清代名医王清任所创，主治血瘀证等，药方始收于《医林改错·上卷》。全方由当归、生地等11味中药组成^[12]。本实验通过复制的大鼠早孕流产模型，较大程度上模拟临床上产后血瘀所致的恶露不绝等临床症状。希望阐明血府逐瘀胶囊对产后恶露不绝的治疗作用及机制。

模型大鼠经过血府逐瘀胶囊治疗后，经血流变和血小板聚集功能检查发现，血府逐瘀胶囊能较大程度改善流产大鼠血瘀等症状，降低模型组大鼠全血及血浆粘度，改善血液黏稠凝滞状态，纠正凝血功能，降低血小板聚集率，增加大鼠血液中血红蛋白和红细胞含量，改善大鼠血虚症状。

CD34抗原是一种阶段特异性白细胞分化抗原，分子量100-120KD，选择性表达造血干细胞、祖细胞及血管内皮细胞的表面。CD34是高度糖基化N型跨膜蛋白^[13]，CD34在新生血管内皮中表达远远大于非新生血管内皮，提示高度表达应该和新血管生成有密切的关系，故CD34为比较敏感的血管内皮标志物^[14]。采用CD34抗原免疫组化法测量子宫微血管密度，能较为直接地反映出流产大鼠经过治疗后的子宫血管再生功能^[15-16]，经过血府逐瘀胶囊的治疗，HE染色结合免疫组织化标记CD34结果显示血府逐瘀胶囊高剂量组大鼠与模型组相比，子宫膜组织排列较为整齐，子宫内膜和内膜下新生血管明显增多，微循环得到一定程度上的改善。

通过本实验研究，血府逐瘀胶囊具有除瘀血生新血的综合疗效，能改善血液浓、黏、滞的状态，改善红细胞变形能力，降低红细胞聚性，抑制血小板聚集从而改变产后瘀血症状，促进血管新生，对产后血瘀、恶露不绝具有较好的治疗作用。