慢性肾功能衰竭（CRF）是各种慢性肾脏疾病持续进展的共同结局，电解质代谢紊乱、内分泌失调、酸碱失衡以及贫血是其早期主要的临床表现^[1-3]。芹菜素（APG）是一种具有广泛生物学活性的天然存在的黄酮类化合物，在多种水果蔬菜中均含量丰富，王珂等^[4]和王强等^[5]研究发现黄酮类化合物对CRF大鼠具有一定的保护作用，本实验将通过复制CRF模型大鼠并腹腔注射给予APG进行治疗，通过相关指标检测并对比正常对照组、模型组实验数据，探讨APG对CRF大鼠贫血和电解质代谢紊乱的影响。

1 材料与方法 1.1 实验动物

健康无特定病原体（SPF级）雄性SD大鼠（8周龄，220~260 g）购自河北省实验动物中心[SCXK（冀）2013-1-003]。饲养环境：23~25 ℃、相对湿度55%~60%，光照周期12 h:12 h。

1.2 药物与试剂

芹菜素（陕西慧科植物开发有限公司，批号：170329）；血清铁（SI）、总铁结合力（TIBC）测定试剂盒（北京博奥森生物技术有限公司，批号：071128、070916）；铁蛋白（FER）酶联免疫吸附法（ELISA）测定试剂盒（美国R&D公司，E01627）；血尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）、尿素（UA）测定试剂盒（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，批号：201711012、201710025、201705023）；腺嘌呤（国药集团化学试剂有限公司）。

1.3 实验方法 1.3.1 分组、造模与给药

取100只实验用大鼠按照随机数字表法随机分为正常对照组、模型组、APG低剂量组[10 mg/（kg·d）]、APG中剂量组[20 mg/（kg·d）]、APG高剂量组[40 mg/（kg·d）]组，每组20只。复制CRF大鼠模型^[6]：制备25%腺嘌呤溶液，连续灌胃21 d [250 mg/（kg·d）]以制备CRF大鼠模型，造模结局判断^[7]：SCr水平高于正常高值，肾脏组织呈现炎性细胞浸润、肾间质纤维化等病理性改变，即造模成功。造模完成后，APG各剂量组腹腔注射给药治疗（1次/日），正常对照组和模型组同步腹腔注射给予生理盐水，疗程28 d。

1.3.2 肾功能指标检测

麻醉后经腹主动脉取血（不做抗凝处理），1 500 r/min离心10 min取血清，通过生化分析仪测定血清中BUN、SCr、UA含量。

1.3.3 肾脏指数的计算

称量各组大鼠体质量，麻醉后开腹摘取两侧肾脏组织，生理盐水冲洗干净后称量左侧肾脏质量，然后进行计算，肾脏指数=左侧肾脏质量/体质量。

1.3.4 贫血监测指标

参照1.3.2方法取血，血常规分析仪测定全血红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、红细胞压积（HCT）；1 500 r/min离心10 min取血清，通过生化分析仪测定各组大鼠血清中SI、TIBC、FER含量。

1.3.5 电解质测定

经腹主动脉取血并分离血清后通过化分析仪测定血清K⁺、Na⁺、Ca²⁺、P³⁺含量。

1.3.6 肾脏组织病理学检查

取右侧肾脏组织，置4%多聚甲醛溶液进行固定，72 h后进行石蜡包埋和切片，脱蜡水化处理后行常规HE染色[依次进行乙醇梯度脱蜡、磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤、苏木素染色5 min、0.5%乙醇盐酸分色、伊红染色20 s等步骤]，通过光学显微镜观察肾脏组织形态。

1.4 统计学处理

运用软件SPSS 18.0进行数据统计分析，实验数据采用均数±标准差（x±s）方式表示，多组间均数比较采用单因素方法分析，组间两两比较采用LSD法，P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果 2.1 各组大鼠肾功能检测结果比较

模型组大鼠血清BUN、SCr、UA含量较正常对照组均显著升高（P < 0.01）；与模型组比较，APG中、高剂量组CRF大鼠血清经治疗28 d后BUN、SCr、UA含量均显著降低，差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。见表 1。

2.2 各组大鼠体质量和肾脏指数结果比较

模型组大鼠体质量、肾脏指数较正常对照组显著升高（P < 0.01）；与模型组比较，APG高剂量组CRF大鼠经治疗28 d后体质量升高（P < 0.05），APG中、高剂量组肾脏指数显著降低（P < 0.01）。见表 2。

2.3 各组大鼠贫血监测指标测定结果比较

模型组大鼠RBC、HGB、HCT、SI、TIBC、FER较正常对照组均显著降低（P < 0.01）；与模型组比较，APG中、高剂量组CRF大鼠经治疗28 d后HGB、HCT、SI、TIBC、FER显著升高，且高剂量组RBC显著升高，差异具有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。见表 3。

2.4 各组大鼠电解质测定结果比较

模型组大鼠血清Ca²⁺含量较正常对照组显著降低且K⁺、Na⁺、P³⁺含量显著升高（P < 0.01）；与模型组比较，APG中、高剂量组CRF大鼠经治疗28 d后血清Ca²⁺含量显著升高（P < 0.05），P³⁺含量显著降低且高剂量组K⁺、Na⁺含量显著降低（P < 0.05或P < 0.01）。见表 4。

2.5 各组大鼠肾脏组织病理学检查结果

正常对照组大鼠肾脏组织结构和细胞形态均未见异常；与正常对照组比较，模型组大鼠肾脏组织呈现明显的病理性改变，主要表现为肾小球数量减少、球囊粘连、囊腔扩大、肾小管坏死、大量炎症细胞和出现、中性粒细胞浸润等；较模型组，经APG中、高剂量组治疗28 d后CRF大鼠肾脏组织病变明显改善，改善效果以高剂量组最为显著。见图 1。

3 讨论

流行病学调查发现CRF发病率达568/100万，具有不可逆及持续进展的特点，是主要致死原因之一^[8]，是临床上亟待解决的医学难题之一。高浓度腺嘌呤持续摄入是常用的CRF大鼠模型造模方法^[7]，该方法制作的CRF大鼠模型异常新陈代谢与人类CRF临床表现及病理改变相似^[9]；该制作方法的机制主要与腺嘌呤代谢形成极难溶于水的2，8-二羟基腺嘌呤，沉积于肾小管并堵塞肾小管腔，影响氮质化合物的排泄，导致氮质血症、毒素蓄积、电解质代谢紊乱而最终引起肾功能衰竭^[10]，此外还可能与2，8-二羟基腺嘌呤阻塞肾小管而引发肾脏组织炎症反应和氧化应激有关^[11]。肾功能指标（BUN、SCr、UA）异常、电解质（P³⁺、K⁺、Na⁺、Ca²⁺）代谢紊乱、贫血以及肾脏组织病变是CRF的主要临床表现^[12]。本实验结果显示，模型组大鼠血清BUN、SCr、UA显著升高，Ca²⁺含量显著降低且K⁺、Na⁺、P³⁺含量显著升高，贫血监测指标明显异常，肾脏组织病理性改变，提示造模成功。

本实验采用腺嘌呤连续灌胃21 d的方法复制CRF模型大鼠，腹腔注射给予APG进行干预治疗，实验结果显示，经APG 20~40 mg/（kg·d）治疗28 d能够有效改善CRF大鼠肾功能（降低血清BUN、SCr、UA含量），降低肾脏指数，抑制肾脏组织形态和细胞结构病变，提示APG对CRF大鼠肾脏组织损伤具有抑制作用。

肾性贫血主要表现为RBC数量降低，HGB、HCT降低，SI、TIBC、FER含量降低^[13-14]。SI是HGB合成的必需元素^[15]，贫血的发生与HGB合成受阻密切相关，因此HGB水平是评价人体是否贫血的重要指标^[16]。本实验结果显示，经APG 20~40 mg/（kg·d）治疗28 d能够有效提高CRF大鼠全血RBC、HGB、HCT水平和血清中SI、TIBC、FER含量，提示APG具有抑制CRF大鼠贫血症状的作用。

电解质代谢紊乱也是CRF患者常见并发症之一，其中钙磷代谢紊乱最常见并形成低钙高磷血症^[17]，此外电解质代谢紊乱还可诱发继发性甲状旁腺功能亢进、血管钙化等^[18]。本实验结果显示，经APG 20~40 mg/（kg·d）治疗28 d能够升高CRF大鼠血清Ca²⁺水平并降低P³⁺、K⁺、Na⁺水平，说明APG具有抑制CRF大鼠电解质代谢紊乱的作用。

综上所述，APG具有改善CRF大鼠贫血、电解质紊乱的药理学作用，可能是APG对CRF能够起到一定保护作用的机制之一。