胃黏膜在维持胃的生理功能中起着重要作用，可以保护深层组织免受胃液成分的破坏和防止黏膜刺激物的摄入^[1-2]。胃黏膜损伤是导致胃溃疡及急慢性胃炎的主要病理生理环节^[3]。针对胃黏膜损伤的治疗，目前西医尚无特效手段，而腹部推拿则善于调理脾胃疾患^[4-5]，相关临床研究已经证实了腹部推拿治疗胃黏膜损伤性疾病具有显著疗效^[6-7]。然而，针对腹部推拿促进胃黏膜损伤修复作用的相关基础研究还处于初级阶段，故本研究以无水乙醇致胃黏膜损伤大鼠作为研究对象，观察腹部推拿对胃黏膜损伤的修复作用，并从调节胃黏膜攻击因子和防御因子平衡的角度初步探讨其作用机制。

1 材料 1.1 实验动物

选用SPF级健康成年SD大鼠30只，6~8周龄，雌雄不限，体质量（200±20）g[北京华阜康生物科技股份有限公司，合格证：SCXK（京）2014-0004]。

1.2 主要试剂与仪器

无水乙醇（科密欧，天津）；4%多聚甲醛（鼎国，北京）；白介素（IL）-6酶联免疫吸附（ELISA）kit（Ebioscience公司，美国）；肿瘤坏死因子（TNF）ELISA kit（Ebioscience公司，美国）；表皮生长因子（EGF）ELISA kit（Ebioscience公司，美国）；MilliQ超纯水系统（Millipore公司，美国）；AL204型分析天平（Mettler-toledo Instruments公司，瑞士）；ST-10组织切片机[世联博研（北京）科技有限公司]；DW-86L628型-80 ℃立式超低温保存箱（Haier公司，中国）。

2 方法 2.1 造模方法

采用无水乙醇灌胃法复制胃黏膜损伤大鼠模型。适应性饲养7 d后，除空白对照组外，其余实验大鼠均禁食不禁水24 h后，按照5 mL/kg的剂量行无水乙醇灌胃1次。模型成功的标准是无水乙醇灌胃后实验大鼠胃黏膜出现条状出血坏死，病理切片可见腺体破坏、炎性细胞浸润等损伤表现。造模后2 h即进行实验观察。

2.2 分组与干预方法

采用随机对照研究方法，运用随机数字表法将造模成功的胃黏膜损伤大鼠随机分为腹部推拿组和模型组，每组各10只。同时设置10只大鼠作为空白对照组。腹部推拿组干预操作方法：实验大鼠取仰卧位，将其束缚于实验台上。操作者右手食指、中指伸直并拢，其余3指屈曲放松，以食指、中指指腹于实验大鼠腹部，利用腕关节带动两指做回旋揉动，揉动频率为20~30次/min，操作10 min，连续治疗21 d，每日正常饲食喂水。模型组每天将实验大鼠束缚于实验台10 min，不予任何干预。空白对照组不予任何干预。

2.3 观察指标及检测方法 2.3.1 观察大鼠行为学改变

扭体反应：观察实验大鼠扭体反应，记录15 min内每只大鼠扭体反应次数，干预前后各观察1次。旷场实验：本实验使用旷场箱长、宽、高均为80 cm的定制塑料箱，内壁涂黑，并将底面均分为25个小方格。测试时，将大鼠置于旷场箱底面中心，并用视频装置录制其6 min内的运动行为。观察指标：以大鼠穿越底面的方格数为水平得分，以后肢站立的次数为垂直活动得分。记录各组动物垂直活动得分、水平活动得分^[8]。干预前后各测量1次。

2.3.2 标本采集及组织病理学观察

实验大鼠断头处死后迅速打开腹腔取胃组织，从幽门部沿胃大弯剪开，肉眼观察胃黏膜组织损伤情况；取1 cm×1 cm胃组织标本，置于4%多聚甲醛中固定，石蜡包埋切片，苏木精-伊红（HE）染色后进行病理学观察；剪取50~100 mg胃黏膜组织，放置于2 mL冻存管中，收藏于-80 ℃冰箱待用。

2.3.3 炎性因子和表皮生长因子检测

将保存的胃黏膜组织以无菌剪刀剪成匀浆；将匀浆放入1.5 mL离心管中，离心机离心半径75 mm，2 500 r/min离心20 min，仔细收集上清液，放入另外的1.5 mL离心管中；采用ELISA法检测胃黏膜组织样本中TNF-α、IL-6和EGF水平，操作严格按照说明书要求进行操作。

2.4 统计学方法

采用SPSS 23.0统计软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD法。P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果 3.1 扭体反应

空白对照组大鼠行为较正常，造模后模型组和腹部推拿组大鼠扭体反应次数显著高于空白对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。腹部推拿干预后腹部推拿组大鼠扭体反应次数明显降低，与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。见表 1。

3.2 旷场实验

空白对照组大鼠活动正常，造模后模型组和腹部推拿组大鼠在旷场箱中的垂直活动得分和水平活动得分显著低于空白对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。腹部推拿干预后腹部推拿组大鼠垂直活动得分和水平活动得分均所提升，与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表 2。

3.3 实验大鼠胃黏膜损伤程度观察

与空白对照组比较，模型组大鼠胃黏膜出现较严重的肉眼可见的损伤，胃黏膜呈粉红色，腺区充血、红肿，伴有点状及长短不一的条状出血坏死，而腹部推拿组大鼠胃黏膜损伤面积和出血面积明显减小。见图 1。

3.4 实验大鼠胃黏膜组织病理学观察

空白对照组大鼠胃黏膜结构完整，腺体清晰，未见明显损伤及炎症反应。模型组大鼠胃黏膜损伤明显，腺体正常结构消失，并可见侵犯黏膜全层的病变，在黏膜下层出现炎性细胞浸润。腹部推拿组大鼠胃黏膜上皮细胞和腺体可见破坏，但部位较浅，炎症反应较少。见图 2。

3.5 腹部推拿对实验大鼠胃黏膜炎性因子分泌的影响

与空白对照组比较，模型组大鼠胃黏膜TNF-α、IL-6的分泌量显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01）。与模型组比较，腹部推拿组大鼠胃黏膜TNF-α、IL-6的分泌量降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。见图 3。

3.6 腹部推拿对实验大鼠胃黏膜EGF含量的影响

与空白对照组比较，模型组大鼠胃黏膜中EGF含量显著降低，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。与模型组比较，腹部推拿组大鼠胃黏膜中EGF含量显著升高，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。见表 3。

4 讨论

胃黏膜损伤性疾病临床表现主要以胃脘部疼痛不适，可伴随嗳气、泛酸、胃脘烧灼感等症状，属中医学中“胃脘痛”的范畴。腹部推拿作为中医推拿学中的一个重要分支，其作用于腹部，通过力学刺激直接调理脾胃脏腑及腹部循行经脉，在治疗以胃肠为主的消化系统疾病中疗效显著。《厘正按摩要术》曰：“胸腹者，五脏六腑之官城，阴阳气血之发源，若欲其脏腑如何，则莫如诊胸腹。”体现了腹部与五脏六腑的密切关系。《指压疗法》一书中更是指出“腹为万病机”，并认为按摩腹部对于治疗疾病深有影响。同时胃经、脾经循行均经过腹部，虽然为腹部推拿治疗胃黏膜损伤性疾病提供了中医理论基础，但仍缺乏相关实验研究对其疗效进行验证。

现代研究表明，胃黏膜损伤的发生是胃黏膜攻击因子与防御因子失调所致^[8-9]。攻击因子主要包括胃酸及白介素、TNF、胃蛋白酶等；防御因子主要有胃黏膜EGF、一氧化氮及前列腺素等^[10]。调节攻击因子和防御因子的平衡是治疗胃黏膜损伤类疾病的关键。无水乙醇灌胃法复制胃黏膜损伤大鼠模型的病变特点、溃疡外形、病理组织学特点、修复、愈合、复发过程与人胃黏膜损伤类似，且制作方便，重复性高，尤其适用于胃黏膜损伤相关机制研究^[11]。故本研究采用无水乙醇灌胃法复制胃黏膜损伤大鼠模型，造模成功后从行为学、解剖学、病理学等方面观察腹部推拿对胃黏膜损伤的修复作用，同时检测胃黏膜炎性因子和EGF含量，进一步探讨腹部推拿促进胃黏膜损伤修复的作用机制。

本研究结果显示，造模后大鼠出现了明显的扭体反应，并且在旷场实验中的垂直活动得分和水平活动得分均减少。予腹部推拿干预后，模型大鼠扭体反应及旷场实验得分均有改善，证明了腹部推拿可以改善胃黏膜损伤大鼠的异常行为学改变。通过对实验大鼠胃黏膜组织解剖学及病理学观察，结果显示，造模后实验大鼠胃黏膜出现了较为严重的肉眼可见的损伤，并且从病理学方面可以观察到胃黏膜腺体正常结构消失，黏膜下层出现炎性细胞浸润等病理改变；而经过腹部推拿干预后，胃黏膜损伤程度均有明显改善，证明了腹部推拿可以促进胃黏膜损伤的修复。经对胃黏膜损伤部位进行总蛋白提取，并分析关键攻击因子TNF-α、IL-6和防御因子EGF的变化，结果显示，造模后TNF-α、IL-6的分泌量明显升高，EGF明显降低；而腹部推拿干预后，TNF-α和IL-6分泌量均有所降低，同时EGF明显升高，初步表明了腹部推拿促进胃黏膜修复的作用机制可能是通过调节胃黏膜攻击因子和防御因子的平衡来实现的。但是胃黏膜损伤性疾病在发病过程中攻击因子和防御因子种类繁多，且相互作用，而腹部推拿的调节机制，仍有待进一步深入研究。