《中国心血管健康与疾病报告2019》指出，中国心血管患病率仍呈持续上升态势，推算冠心病患者约占心血管患病总数的3.33%，且心血管病死率仍占首位，而急性冠脉综合征（ACS）是导致心血管病死率居高不下的重要原因^[1]。ACS是以冠状动脉粥样硬化斑块破裂、侵袭，继发完全或不完全闭塞性血栓形成为病例基础的一组临床征象，主要包括急性ST段抬高性心肌梗死（AMI），急性非ST段抬高性心肌梗死以及不稳定型心绞痛（UA）^[2]。

对于ACS的治疗以经皮冠状动脉介入治疗（PCI）为常见方案，但PCI术后易造成血管机械性损伤及再狭窄等事件，导致继发性心绞痛^[3]。目前，临床对于PCI术后药物治疗以抗血小板聚集、降脂类药物为主，但治疗效果相对有限。

中医学将ACS归属于胸痹、心痛范畴。《医林改错》有云“元气既虚，必不能达于血管，血管无气，必停留而瘀”，认为其病位在于心，基本病机为瘀血内停、日久气虚，病性总属本虚标实，以气虚为本，血瘀为标，治当扶正祛邪，益气活血^[4]。芪参益气滴丸（QSYQ）是中医临床上常见的治疗气虚血瘀型胸痹的推荐中成药，具有益气通脉，活血止痛的功效。临床研究表明，QSYQ可有效改善AMI患者PCI术后血清炎症水平，减轻心梗面积，改善心功能及内皮功能^[5-6]。此外，QSYQ联合西药可有效缓解UA患者的症状，降低心绞痛发作频率，减少主要心血管不良事件发生率^[7-8]。

然而，中药复方具有化学成分复杂、作用机制多样的特点，QSYQ治疗ACS的物质基础及作用机制尚不明确。因此，利用网络药理学和分子对接的方法对QSYQ治疗ACS的活性成分和作用靶点进行分析，对于解释其治疗ACS的作用机制并拓宽临床思路有重要意义。

1 材料与方法 1.1 QSYQ有效成分及核心作用靶点筛选的方法

分别以QSYQ的药物组成黄芪、丹参、三七、降香为关键词，按照口服生物利用度（OB）≥30%和类药性（DL）≥0.18为筛选标准，在TCMSP（http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php）及Batman（http://bionet.ncpsb.org.cn/batman-tcm/）平台分别检索有效成分，并提取对应作用靶点。

1.2 AMI和UA靶点的收集的方法

通过Gene Cards（https://www.genecards.org/），OMIM（https://omim.org/），drugbank（https://go.drugbank.com/），pharmGKB（https://www.pharmgkb.org/），TTD（http://db.idrblab.net/ttd/），CTD（http://ctdbase.org/）平台，分别以“Acute myocardial infarction”、“Unstable angina pectoris”为关键词进行检索，明确疾病相关靶点。

1.3 QSYQ治疗AMI和UA的潜在作用靶点确定的方法

将QSYQ与AMI和UA疾病靶点取交集，得到二者的交集靶点，即QSYQ治疗AMI和UA的潜在作用靶点。

1.4 “药物-有效成分-作用靶点-疾病”网络构建的方法

将药物、有效成分、作用靶点、疾病的相关数据信息导入Cytoscape3.7.2软件并建立网络图。

1.5 PPI网络的构建及分析的方法

将作用靶点上传至STRING数据库，导入Cytoscape3.7.2软件，绘制PPI网络图，以≥2倍DC中位数21，再取≥2倍BC中位21.3数作为筛选标准，得到关键靶点。

1.6 GO功能富集分析和KEGG通路富集分析的方法

将作用靶点上传至DAVID平台，对潜在有效靶点进行GO和KEGG注释分析。

1.7 关键活性成分-关键靶点分子对接的方法

下载小分子配体文件2D结构，下载核心靶点蛋白质结构，除去水分子，分离原配体，加氢、格式化后保存大分子受体，利用Autodock Tools 1.5.6确定受体和配体结合的可能区域。进行分子对接，以结合能≤-5.0 kJ/mol作为筛选标准，建立对接相互作用模式图。

2 结果 2.1 QSYQ有效成分及核心作用靶点筛选

利用TCMSP及Batman平台，分别以黄芪、丹参、三七、降香为关键词，检索有效成分，共得到有效成分130个，其中黄芪20个、丹参65个、三七8个、降香37个。利用TCMSP平台检索有效成分对应靶点，其中黄芪943个、丹参2 652个、三七709个、降香965个，经去重后得到作用靶点2 022个，以OB值大小排序，列出前10位有效化学成分，见表 1。

2.2 AMI和UA的相关靶点

分别以“Acute myocardial infarction”“Unstable angina pectoris”为关键词检索，分别得到相关靶点747个、155个。

2.3 QSYQ治疗AMI和UA的潜在作用靶点

将QSYQ作用靶点分别与AMI和UA相关靶点进行交集，得到共同作用靶点36个，见图 1。

2.4 PPI网络图构建及分析

将共同作用靶点导入STRING平台，得到蛋白互作信息，见图 2。建立PPI网络图，见图 3。筛选出关键靶点7个：IL-6、SERPINE1、IL-1B、TP53、NOS3、FOS、F3。

2.5 GO功能富集分析和KEGG通路富集分析

GO功能富集分析经筛选共得到217条，其中生物过程180条，分子功能18条，细胞组分19条，见图 4。KEGG通路富集分析经筛选共得到69条，见图 5。

2.6 关键活性成分-关键靶点分子对接

以PPI蛋白互作网络选取7个关键靶点与相应关键活性成分进行分子对接，见表 2。建立分子对接互作模式图，结果显示所有关键靶点与关键活性成分均可自发结合，形成较为稳定的构象，说明QSYQ关键活性成分与治疗AMI、UA的关键作用靶点具有较好的结合活性，见图 6。

3 讨论

本研究通过网络药理学筛选得到QSYQ的成分主要有槲皮素、木犀草素、β-谷甾醇、芒柄花素、丹参酮ⅡA、人参皂苷rh2等。研究显示，槲皮素可通过上调SIRT1降低心肌梗死的微血管通透性^[9]。木犀草素发挥抗心肌损伤的作用可能与NF-κB通路相关^[10]。β-谷甾醇通过ERKI/2信号通路发挥抗心肌氧化应激和炎症损伤，减轻心肌细胞凋亡^[11]。芒柄花素可调节TNF-α、IL-1β水平，发挥抗心肌缺血的作用^[12]。丹参酮ⅡA通过调节AngⅡ-（AT-1R）-Cx43信号通路，发挥抗冠心病血瘀证再灌注损伤的作用^[13]。人参皂苷rh2可明显改善氧化应激及炎症水平，增加心肌缺血再灌注后血EPCs^[14]。

通过“药物-有效成分-作用靶点-疾病”的网络，发现PTGS2、NOS2、CASP3、TNF、CCND1、ICAM1、IFNG、MMP9、TP53、CD40LG等核心靶点而达到治疗ACS的作用。PTGS2（COX2）是NF-κB的下游因子，NF-κB活化后，启动COX2的转录，上调TNF-α，IL-1β，IL-6，ICAM1的表达，在机体免疫、炎症中发挥作用，并且可升高Caspase3水平，诱导心肌细胞凋亡^[15]。CD40L是活化的CD40细胞，在心脏功能异常情况下大量分泌，与炎细胞水平呈正相关^[16]。NOS2通过cGMP途径对下游靶蛋白进行磷酸化等多种翻译及修饰，引起心肌损伤^[17]。TP53INP1介导p53的抗氧化活性，表达升高易导致心肌细胞自噬小体的破裂，加重心肌损伤^[18]。

GO富集分析发现，QSYQ治疗ACS的生物学功能主要体现在一氧化氮生物合成过程的正调控、对缺氧的反应、细胞对脂多糖的反应、细胞外间隙等方面。KEGG通路显示，QSYQ各关键靶点主要涉及TNF信号通路、NF-κB信号通路、NOD样受体信号通路、HIF-1信号通路等。缺血时HIF-1α的表达是内源性保护机制的始动因子和共同途径，此时HIF-1α表达降低，加重心肌损伤程度，降低心功能^[19]。NOD样受体蛋白3调节心肌细胞焦亡，而由其介导的心肌损伤可能与调控NLRP3相关，同时研究表明改善NF-κB信号通路、TNF信号通路相关的IL-6，IL-1β，Caspase1等炎症因子水平，有利于减轻心肌细胞损伤^[20]。

综上，本研究通过网络药理学联合分子对接的方法，发现槲皮素、木犀草素、β-谷甾醇、芒柄花素、丹参酮ⅡA、人参皂苷rh2等为QSYQ的主要活性成分，PTGS2、NOS2、CASP3、TNF、CCND1、ICAM1、IFNG、MMP9、TP53、CD40LG为主要作用靶标，主要与TNF信号通路、NF-κB信号通路、NOD样受体信号通路、HIF-1信号通路等通路相关，分子对接验证了木犀草素、槲皮素、人参皂苷rh2、丹参酮ⅡA的化合物与IL-6、SERPINE1、IL-1B、TP53、NOS3、FOS、F3的核心靶点。鉴于网络药理学和分子对接的局限性，后期需对本研究结果进行，为QSYQ治疗ACS提供实验和临床依据。