2025, Vol. 42文章信息
- 许光晶, 吴玉洁, 王晓宇, 等.
- XU Guangjing, WU Yujie, WANG Xiaoyu, et al.
- 双黄连速释口腔崩解片与分散片的制备及体内药代动力学评价
- Preparation and in vivo pharmacokinetic evaluation of Shuanghuanglian immediate-release orally disintegrating tablets and dispersible tablets
- 天津中医药, 2025, 42(11): 1425-1434
- Tianjin Journal of Traditional Chinese Medicine, 2025, 42(11): 1425-1434
- http://dx.doi.org/10.11656/j.issn.1672-1519.2025.11.11
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文章历史
- 收稿日期: 2025-07-04
引用本文 |
2. 天津市中药智能制药与绿色制药重点实验室, 天津 301617
急性呼吸道感染（ARTI）由多种病毒和细菌引起[1-2]，具有高发病率、传播迅速以及流行范围广的特点[3]。近年来，急性呼吸道感染（ARTI）的发病率和严重程度逐渐上升，对个人的身心健康构成了严重威胁，同时也加重了社会经济负担。因此，迫切需要实施有效的预防措施和治疗策略[4]。
双黄连临床上常用于治疗由呼吸道感染引起的各种疾病[5]。当前，双黄连制剂有多种剂型可供选择，包括注射液、口服液及片剂等[6]。研究表明市面上的双黄连剂型中，注射剂虽疗效好，但不良反应较大，且须在医生指导下使用[7]；口服液存在携带不便，稳定性差的缺点；普通片剂生物利用度较低，老少人群使用不便[8]。因此，为提高药物生物利用度及方便老人和幼儿使用，开发双黄连口服固体速释制剂势在必行。
近年来，口服固体速释制剂迅速发展，在患者服用过程中可使药物有着更高的吸收，提升药物的整体利用率，减少不良反应，发挥药物的更大价值[9-10]。口腔崩解片（ODT）是一种与唾液接触后可在口腔迅速崩解的输送系统[11]；具有快速分解、无需用水即可使用的特性。分散片（DT）是在给药前将药物分散在液体（通常是水）中，使其在液体中均匀分散[12]。与普通的糖浆和粉剂等剂型相比，分散片不需要特定的储存要求，不易有稳定性和微生物的问题[13]。因此，与中药传统剂型相比，中药口服固体速释制剂具有诸多优势。
因此，本研究结合双黄连复方的理化性质及口服给药特点，构建两种口服固体速释制剂，并对其进行相关制剂表征、体外溶出度考察以及药代动力学评价。以期构建吸收迅速、服用方便，具有较高生物利用度的双黄连口服固体速释制剂，并比较两种速释制剂对口服生物利用度的提高程度，为开发中药复方双黄连口服固体速释制剂提供思路。
1 材料 1.1 仪器高分辨质谱仪Q Exactive，赛默飞世尔科技公司；超高效液相系统，Waters公司；涡旋振荡器，Scientific industries公司；超声波清洗器，宁波新芝生物股份科技有限公司；全自动新型鼓风干燥箱，上海智城分析仪器制造有限公司；电热恒温干燥箱，天津天宇实验仪器有限公司；压片机，Romaco公司；硬度检测仪，ERWEKA公司；脆碎度测试仪，ERWEKA公司；溶出仪，Agilent公司；崩解仪，天津市天大天发科技有限公司；旋转蒸发仪，东京理化器械株式会社；傅立叶变换红外光谱仪，Thermo Fisher公司。
1.2 试剂新绿原酸（纯度≥98%，批号：P30N10L104575）、绿原酸（纯度≥96.8%，批号：110759-201817）、连翘酯苷A（纯度≥97.2%，批号：111810-201707）、连翘苷（纯度≥95.1%，批号：110821-201816）、黄芩苷（纯度≥95.4%，批号：110715-201821）中国食品药品检定研究院；隐绿原酸（纯度≥98%，批号：P11M10L88123）、獐牙菜苷（纯度≥98%，批号：P25O10F101344）、獐牙菜苦苷（纯度≥98%，批号：Y25J10J91429）、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛苷（纯度≥98%，批号：Y31M9H62597）、异绿原酸B（纯度≥98%，批号：P17N11L131404）、原儿茶酸（纯度≥98%，批号：H21J9Z64031）、木犀草苷（纯度≥98%，批号：Y13J10H930505）购自上海源叶生物科技有限公司；交联聚维酮（SH-SL10）、低取代羟丙基纤维素（SH-LH11）、交联羧甲基纤维素钠、微晶纤维素112，预胶化淀粉（SH-YJ-H）、聚乙烯吡咯烷酮K30，安徽山河药物辅料股份股份有限公司等。
1.3 动物实验所用新西兰白兔，由天津中医药大学实验动物中心提供。本研究已获得天津中医药大学伦理委员会批准（批准号：TCM-LAEC2020063），实验前12 h内，动物禁食但可自由饮水。
2 方法与结果 2.1 SHL复方成分的定性分析 2.1.1 色谱条件色谱柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（1.7 μm，2.1 mm×100 mm）；流动相：0.1%甲酸水（A）-乙腈（B）；梯度洗脱条件：0~7 min，5%~10%（B）；7~8 min，10%~13%（B）；8~12 min，13%~20%（B）；12~18 min，20%~30%（B）；18~19 min，30%~40%（B）；19~25 min，40%~50%（B）；25~27.5 min，50%~60%（B）；流速；0.2 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：1 μL。
2.1.2 质谱条件定性分析：离子源为高能电喷雾离子源（HESI），喷雾电压-3.5 kV，毛细管温度320 ℃，离子源温度350 ℃，鞘气30 arb，辅气5 arb，碰撞裂解能量NCE10/30/50 V。扫描范围为100~1 500 m/z，检测时间为27.5 min。ESI负离子模式下进行数据采集。
2.1.3 供试品溶液的制备精密称定5.23 mg双黄连提取物，置于50 mL容量瓶中，加入适量80%的甲醇进行溶解，超声3 min后，待容量瓶中液体冷却至室温，用80%的甲醇稀释至刻度线，得到储备液，14 000 r/min离心10 min，离心半径6 cm，取上清液1 μL进行超高效液相色谱-四极杆-轨道阱质谱联用技术（UPLC-Q-Orbitrap-MS）分析。
2.1.4 对照品溶液的制备分别精密称定黄芩苷、绿原酸、连翘苷、连翘酯苷A、木犀草苷、獐牙菜苷、獐芽菜苦苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛苷、异绿原酸B、原儿茶酸、新绿原酸、隐绿原酸对照品粉末2 mg，分别置于10 mL容量瓶中，加入适量80%甲醇溶解，超声3 min。待容量瓶中液体冷却至室温后，用80%甲醇稀释至刻度，再稀释10倍得浓度为20 μg/mL的12种标准品储备液。将以上标准品储备液除同分异构体外混合配成浓度为500 ng/mL的混合标准品溶液，取1 μL进样分析。同分异构体单独进样分析。得出双黄连提取物在负离子模式下的总离子流图。见图 1。通过与相关文献对比，共检测到74种化学成分，详情见开放科学计划（OSID）标识码。在这些化合物中，新绿原酸、绿原酸、芦丁、连翘酯苷A、木犀草苷、黄芩苷、连翘苷和千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛苷均具有强大的抗炎和抗感染药理作用。因此，上述8种化合物被选为药代动力学研究的指标成分。
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| 图 1 双黄连提取物在负离子模式下的总离子流图 Fig. 1 Total ion flow diagram of SHL extract in negative ion mode |
SHL-ODT采用直接压片法制备。选用交联聚维酮（PVPP）与低取代羟丙基纤维素（L-HPC）作为崩解剂。辅料干燥并通过100目筛，药物则通过80目筛进行筛分[14]。将黄芩提取物、金银花提取物、连翘提取物按比例混合成双黄连提取物。称取89 mg PVPP、89 mg L-HPC、74 mg甘露醇、7.5 mg柠檬酸、7.5 mg阿斯巴甜、3.0 mg硬脂酸镁和双黄连提取物120 mg。将所有物料混合均匀后，采用粉末直接压片法压制SHL-ODT，硬度维持在30~40 N。
2.3 双黄连分散片（SHL-DT）的制备固体分散体（SD）它使药物在载体中有效分散，从而提高难溶性药物的溶解度和生物利用度[15-17]。在制备SHL-DT之前，首先将黄芩提取物制备成黄芩提取固体分散体（SBE-SD），以提高不溶性成分的溶解度。
称取适量黄芩提取物和PVPK 30，载体和药物为2∶1，加入甲醇并超声5 min使其溶解完全，在旋转蒸发仪上减压挥去有机溶剂，并置于真空干燥箱中干燥24 h后，将干燥好的SBE-SD取出，在研钵中研碎后，过100目筛，干燥器中保存。将SBE-SD、金银花提取物、连翘提取物按一定比例混合成双黄连提取物。按处方：PVPP-L-HPC（1∶2）130 mg/片、甘露醇38 mg/片、双黄连提取物205 mg/片、阿斯巴甜7.5 mg/片、柠檬酸7.5 mg/片、硬脂酸镁2.0 mg/片称取。首先将所有辅料混合均匀，之后加入双黄连提取物，将所有物料混合均匀后，采用粉末直接压片法压制SHL-DT，硬度维持在30~40 N。
2.4 SHL-ODT与SHL-DT制剂的表征 2.4.1 傅立叶变换红外光谱（FT-IR）称取SBE、PVPK 30、SBE和PVPK30的物理混合物和SBE-SD适量，分别加入适量溴化钾（KBr），混合均匀后压片，在波数为4 000~400 cm-1的范围内，采用FT-IR进行测定，结果图谱见图 2，通过对比4种红外光谱图，发现黄芩苷在3 411 cm-1处存在-OH的特征吸收峰，辅料和药物的物理混合物中，依旧存在此吸收峰，说明PVPK 30和SBE只是简单的混合，依旧存在黄芩苷的特性。辅料PVPK 30并无此特征吸收峰，且SBE-SD的红外吸收光谱和辅料的红外吸收光谱基本相同，说明成功制备得到SBE-SD。
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| 注：A为PVP K30，B为SBE，C为物理混合物，D为SBE-SD。 图 2 傅立叶变换红外光谱图 Fig. 2 Fourier transform infrared(FTIR) spectrograms |
取6片SHL-DT，按照2020版《中国药典》规定的分散均匀度测定，所制备的3批SHL-DT的分散均匀度均在180 s以内崩解完全，满足分散片的要求。
2.4.3 崩解时限取2 mL的37 ℃水于10 mL量筒中，并放入口崩片，从口崩片接触水面开始计时，直到SHL-ODT完全崩解成颗粒且无硬芯能全部通过2号筛的时间为口腔崩解片的崩解时间。结果表明所制备的3批SHL-ODT的崩解时间均在60 s以内崩解完全，满足口崩片的要求。
2.4.4 质量差异、硬度和脆碎度参照2020年版《中国药典》检查SHL-ODT和SHL-DT的质量差异、硬度和脆碎度，结果见表 1。
| 剂型 | 硬度(x±s, N) | 质量差异(%) | 脆碎度(%) |
| SHL–ODT | 37.66±3.39 | -3.70~3.29 | 0.80 |
| SHL–DT | 36.50±1.38 | -3.78~3.41 | 0.80 |
色谱条件：色谱柱：Gensial C18色谱柱（5 μm，250×4.6 mm）；流动相：A 0.1%的甲酸-水，B乙腈；流动相梯度0~5 min，15%~15%（B）；5~9 min，15%~18%（B）；9~15 min，18%~25%（B）；15~25 min，25~30%（B）；流速1 mL/min；柱温30 ℃；检测波长277 nm；进样量10 μL。
2.5.2 体外溶出度的测定绿原酸、黄芩苷和连翘苷为体外测定的主成分[18]。采用pH为6.8的磷酸盐缓冲溶液为溶出介质，溶出温度为（37±0.5）℃，桨转速为50 r/min。按照2020版《中国药典》中规定的溶出方法中的桨法进行体外溶出度测定。结果见图 3，在45 min内，绿原酸、黄芩苷和连翘苷的溶出度达到90%以上，表明SHL-ODT崩解后，体外溶出迅速，重现性好。SHL-DT体外溶出结果见图 4。3批SHL-DT主成分绿原酸、黄芩苷、连翘苷在磷酸盐缓冲溶液的溶出曲线相似。在45 min内，绿原酸、黄芩苷和连翘苷的溶出达到90%以上。结果表明SHL-DT体外溶出较好，制备工艺稳定，重现性好。
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| 注：A为绿原酸，B为黄芩苷，C为连翘苷。 图 3 SHL-ODT主成分的溶出度曲线（n=3） Fig. 3 Dissolution profiles of SHL-ODT principal components(n=3) |
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| 注：A为绿原酸，B为黄芩苷，C为连翘苷。 图 4 SHL-DT主成分的溶出度曲线（n=3） Fig. 4 Solubility curves of SHL-DT principal components(n=3) |
精密称取新绿原酸、绿原酸、芦丁、连翘酯苷A、木犀草苷、黄芩苷、连翘苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛苷2.5 mg分别放入8个25 mL容量瓶中，加入适量80%甲醇超声定容后将上述母液释成7个不同浓度点，放入4 ℃冰箱备用。
内标溶液的制备：取葛根素标准品2.29 mg，置于10 mL容量瓶中，加入适量甲醇溶解，超声10 min，使其全部溶解，冷却定容至10 mL，摇匀后于4 ℃冰箱中保存备用。
2.6.2 血浆样品处理精密吸取100 μL血浆样品，放入1.5 mL离心管中，依次加入10 μL内标溶液、400 μL甲醇后，涡旋振荡2 min，14 000 r/min离心10 min后，取上清液400 μL后加3 μL甲酸，混匀后，氮气吹干，50 μL体积分数为80%的甲醇溶液复溶，涡旋1 min，超声2 min，再涡旋1 min，然后14 000 r/min离心10 min，离心半径6 cm取上清液放入进样小瓶中，进样3 μL进行分析。
2.6.3 药代动力学的检测方法色谱条件：流动相0.1%甲酸水（A）-乙腈（B）；梯度洗脱条件0~2 min，10%~13%（B）；2~5 min，13%~20%（B）；5~7 min，20~23%（B）；7~13 min，23%~23%（B）；进样量3 μL。其余同“2.1.1”。
质谱条件：碰撞裂解能量NCE20/40/50 V。其余同“2.1.2”。目标化合物和内标的PRM参数见表 2。
| 化合物 | 保留时间(min) | 前体离子(m/z) | 产物离子(m/z) | Collision Energy(V) |
| 新绿原酸 | 1.730 | 353.087 8 | 191.054 32 | 30 |
| 绿原酸 | 2.440 | 353.087 8 | 191.054 32 | 30 |
| 芦丁 | 5.190 | 609.146 1 | 300.026 15 | 40 |
| 连翘醛苷A | 5.570 | 623.198 1 | 161.022 58 | 40 |
| 木犀草苷 | 5.670 | 447.073 3 | 285.390 60 | 40 |
| 黄芩甘 | 8.630 | 445.077 6 | 269.045 01 | 30 |
| 连翘苷 | 9.530 | 579.208 3 | 371.148 13 | 20 |
| 千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛苷 | 11.480 | 459.093 3 | 283.060 09 | 30 |
| 葛根素 | 3.080 | 415.103 5 | 267.065 73 | 40 |
1）专属性。A：取6只不同批次家兔的空白血浆100 μL，不加目标化合物混合标准品溶液和内标；B：将内标溶液、一定浓度的混合标准品溶液分别加入到6只不同批次家兔的空白血浆中；C：家兔口服给药后的血浆样品。将上述样品按照“2.6.2”项下血浆样品方法进行处理。8个待测物及内标峰形良好血浆中的内源性杂质对目标化合物的测定没有影响。见图 5。
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| 注：A为空白血浆，B为含有混合标准品和内标的空白血浆，C为家兔口服给药后的血浆。1~9分别表示化合物，1为新绿原酸，2为绿原酸，3为芦丁，4为连翘酯苷A，5为木犀草苷，6为黄芩苷，7为连翘苷，8为千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛苷，9为葛根素。 图 5 待测物在血浆样品中的专属性图 Fig. 5 Specific properties of the substance to be measured in the plasma sample |
2）标准曲线与线性范围。以8个目标化合物的峰面积与内标葛根素的峰面积比值对目标化合物的浓度进行线性拟合，得到8个目标化合物的回归方程。各个目标化合物的回归方程在线性范围内线性关系良好，R2均大于0.99。见表 3。
| 药物 | 标准曲线 | 线性范围(ng/mL) | R2 |
| 新绿原酸 | Y=0.00 361 835X+0.0 125 789 | 1.953~125.0 | 0.998 8 |
| 绿原酸 | Y=0.00 883 843X+0.1 223 338 | 1.953~500.0 | 0.997 5 |
| 芦丁 | Y=0.00 435 524X+0.0 168 313 | 1.953~125.0 | 0.999 5 |
| 连翘酯苷A | Y=0.00 361 276X+0.0 323 431 | 1.953~125.0 | 0.996 9 |
| 木犀草苷 | Y=0.0 112 518X+0.0 259 966 | 1.953~125.0 | 0.999 6 |
| 黄芩苷 | Y=0.000 861 977 X+0.0 394 956 | 3.906~2000 | 0.992 7 |
| 连翘苷 | Y=0.000 621 568X+0.0 115 227 | 7.812~300.0 | 0.998 8 |
| 千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛苷 | Y=0.00 950 973X+0.0 113 862 | 1.953~125.0 | 0.999 4 |
3）精密度。日内精密度和日间精密度的RSD值在13%以内，准确度为90%~114%。表明所建立的方法可以满足家兔血浆样品中8个定量成分的测定，具有良好的精密度和准确度。精密度考察结果见表 4。
| 成分 | 浓度(ng/mL) | 日内精度(n=6) | 日间精度(n=3) | |||||
| 测量值(x±s，ng/mL) | RSD(%) | 精度(%) | 测量值(x±s，ng/mL) | RSD(%) | 精度(%) | |||
| 新绿原酸 | 3.91 | 4.01± 0.26 | 6.45 | 102.50 | 3.90± 0.28 | 7.06 | 99.82 | |
| 15.63 | 14.45± 1.26 | 8.71 | 92.54 | 14.42± 1.51 | 10.40 | 92.29 | ||
| 62.50 | 63.27± 0.84 | 1.33 | 101.20 | 57.85± 4.47 | 7.73 | 92.56 | ||
| 绿原酸 | 3.91 | 3.82± 0.37 | 9.61 | 97.72 | 3.78± 0.33 | 8.82 | 96.74 | |
| 31.25 | 30.57± 0.50 | 1.64 | 97.83 | 31.90± 2.78 | 8.70 | 102.00 | ||
| 250.00 | 257.60± 3.97 | 1.54 | 103.00 | 257.80±14.23 | 5.52 | 103.10 | ||
| 芦丁 | 3.91 | 3.90± 0.40 | 10.20 | 99.79 | 3.95± 0.30 | 7.69 | 100.90 | |
| 15.63 | 15.99± 1.68 | 10.40 | 102.30 | 15.50± 1.39 | 8.95 | 99.25 | ||
| 62.50 | 60.35± 2.37 | 3.92 | 96.56 | 59.61± 5.88 | 9.85 | 95.39 | ||
| 连翘酯苷A | 3.91 | 3.93± 0.19 | 4.88 | 100.60 | 3.93± 0.38 | 9.54 | 100.60 | |
| 15.63 | 14.72± 0.78 | 5.32 | 94.26 | 14.23± 1.35 | 9.46 | 91.11 | ||
| 62.50 | 62.21± 2.00 | 3.22 | 99.50 | 59.66± 4.65 | 7.77 | 95.45 | ||
| 木犀草苷 | 3.91 | 3.65± 0.45 | 12.30 | 93.41 | 3.64± 0.34 | 9.31 | 93.23 | |
| 15.63 | 15.63± 0.40 | 2.53 | 100.00 | 16.25± 1.03 | 6.34 | 104.00 | ||
| 62.50 | 62.18± 0.57 | 0.91 | 99.49 | 62.07± 4.29 | 6.90 | 99.31 | ||
| 黄芩苷 | 3.91 | 4.04± 0.34 | 8.31 | 103.20 | 3.94± 0.38 | 9.64 | 99.15 | |
| 125.00 | 125.30± 3.18 | 2.53 | 100.20 | 119.60±10.62 | 8.88 | 95.72 | ||
| 1 000.00 | 1 000.00±20.67 | 1.98 | 104.40 | 104.30±72.36 | 6.93 | 104.30 | ||
| 连翘苷 | 7.84 | 7.20± 0.66 | 9.17 | 92.11 | 7.24± 0.74 | 10.30 | 92.35 | |
| 31.25 | 36.04± 4.69 | 13.00 | 115.30 | 33.84± 3.91 | 11.50 | 108.30 | ||
| 125.00 | 131.40± 5.42 | 4.11 | 105.10 | 119.60± 9.87 | 8.24 | 95.70 | ||
| 千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛苷 | 3.91 | 3.59± 0.23 | 6.47 | 91.84 | 3.68± 0.28 | 7.46 | 94.15 | |
| 15.63 | 14.65± 0.55 | 3.72 | 93.80 | 15.03± 1.33 | 8.83 | 96.19 | ||
| 62.50 | 59.23± 3.26 | 5.49 | 94.78 | 60.67± 3.96 | 6.51 | 97.08 | ||
4）提取回收率和基质效应考察。低、中、高3个浓度的目标化合物血浆样品的提取回收率是76%~102%；基质效应介于75%~117%，在可接受的范围内。上述结果表明，该方法可有效消除血浆样品中基质的干扰，提高目标化合物的准确定量能力。提取回收率和基质效应考察结果见表 5。
| 成分 | 浓度(ng/mL) | 提取回收率(x±s，%) | 基质效应(x±s，%) | 成分 | 浓度(ng/mL) | 提取回收率(x±s，%) | 基质效应(x±s，%) | |
| 新绿原酸 | 3.91 | 88.44± 5.74 | 99.98±12.69 | 木犀草苷 | 3.91 | 99.94± 8.20 | 116.20± 4.98 | |
| 15.63 | 101.20± 1.28 | 86.25± 5.87 | 15.63 | 83.97± 2.45 | 113.70± 8.05 | |||
| 62.50 | 92.31± 4.21 | 80.76± 3.35 | 62.50 | 84.64± 5.89 | 102.90± 1.20 | |||
| 绿原酸 | 3.91 | 83.67± 7.17 | 115.80± 6.87 | 黄芩苷 | 3.91 | 99.57±16.84 | 102.90±18.27 | |
| 31.25 | 90.05± 9.49 | 102.30± 9.88 | 125.00 | 92.77± 8.24 | 99.57± 5.89 | |||
| 250.00 | 89.39± 2.50 | 76.61± 1.46 | 1000.00 | 100.30± 1.46 | 109.90± 2.93 | |||
| 芦丁 | 3.91 | 94.49±14.30 | 93.81±20.02 | 连翘苷 | 7.81 | 77.78±19.24 | 91.67±14.43 | |
| 15.63 | 86.27± 4.37 | 111.90± 9.45 | 31.25 | 89.63±10.02 | 112.50±12.50 | |||
| 62.50 | 83.32± 2.60 | 106.50± 2.48 | 125.00 | 98.06± 1.68 | 104.10± 3.56 | |||
| 连翘酯苷A | 3.91 | 80.06± 8.18 | 103.30±13.77 | 千层纸素A-7-O- | 3.91 | 98.15± 3.21 | 96.40± 6.92 | |
| 15.63 | 77.99± 3.94 | 113.90± 8.89 | β-D-葡萄糖醛苷 | 15.63 | 99.63± 2.79 | 106.70± 3.34 | ||
| 62.50 | 95.12± 4.90 | 83.74± 5.55 | 62.50 | 96.77± 1.92 | 107.40± 3.70 |
参考实验方法[19]，将家兔随机分为3组：双黄连普通片（SHL-OT）组（将双黄连提取物，参照《中国药典》2020版一部双黄连片制法制备所得）、SHL-ODT组和SHL-DT组，每组5只。根据等效剂量系数转换法，将3种片剂用水作为溶剂溶解，并通过灌胃方式给予家兔。在给药前后的不同时间点5、10、15、20、25、30、60、90、120、180、240 min，从家兔的耳静脉中采集血液，置于1.5 mL肝素化的离心管中。然后，将离心管在4 ℃下以8 000 r/min，离心半径6 cm，离心10 min。最后，取1 μL上清液进行测定分析。通过在不同时间点采集样品绘制血浆中药物浓度进而得到8种药物的药时曲线如图 6所示，A-H分别代表新绿原酸、绿原酸、芦丁、连翘酯苷A、木犀草苷、黄芩苷、连翘苷和千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛苷的药时曲线图。
|
| 注：图A为新绿原酸；图B为绿原酸；图C为芦丁；图D为连翘酯苷；图E为木犀草苷；图F为黄芩苷；图G为连翘苷；图H为千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛苷。 图 6 8个目标化合物的血药浓度-时间曲线图（x±s，n=5） Fig. 6 Blood concentration-time profiles of the eight target compounds(x±s, n=5) |
SHL-ODT和SHL-DT中新绿原酸的AUC(0-t)分别为SHL-OT组的2.09和2.31倍（P＜0.01）；绿原酸的AUC(0-t)分别为SHL-OT组的1.71和1.94倍（P＜0.05）；芦丁的AUC(0-t)分别为SHL-OT组的1.94和1.96倍（P＜0.05）；连翘酯苷A的AUC(0-t)分别为SHL-OT组的1.74和1.97倍（P＜0.01）；木犀草苷的AUC(0-t)分别为SHL-OT组的1.81和1.92（P＜0.05）；黄芩苷的AUC(0-t)分别为SHL-OT组的2.07和2.37倍（P＜0.01）；连翘苷的AUC(0-t)分别为SHL-OT组的1.87和2.12倍（P＜0.05）；千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛苷的AUC(0-t)分别为SHL-OT组的1.48和1.66倍（P＜0.05）。见表 6。
| 成分 | 组别 | 参数 | |||||
| t1/2(h) | Cmax(ng/mL) | Tmax(h) | AUC(0-t)(ng/mL·h) | AUC(0-∞)(ng/mL·h) | |||
| 新绿原酸 | SHL-OT | 3.07±1.00 | 34.17± 15.97 | 1.50±0.87 | 79.05± 6.80 | 81.87± 4.21 | |
| SHL-ODT | 3.08±1.75 | 49.50± 18.48 | 0.61±0.47 | 165.80± 20.14** | 176.70± 10.20** | ||
| SHL-DT | 2.67±0.90 | 93.78± 52.68* | 0.61±0.47 | 182.30± 38.95** | 196.60± 47.25** | ||
| 绿原酸 | SHL-OT | 5.92±0.96 | 208.00± 49.59 | 1.17±0.29 | 718.90± 230.80 | 795.90± 325.00 | |
| SHL-ODT | 5.72±2.46 | 348.70± 159.60* | 0.56±0.82 | 1 226.00± 36.05* | 1 511.00± 204.80 | ||
| SHL-DT | 5.49±0.42 | 431.70± 311.10* | 0.58±0.80 | 1 396.00± 196.10** | 2 001.00± 452.10* | ||
| 芦丁 | SHL-OT | 6.69±1.13 | 36.86± 21.12 | 1.20±1.00 | 121.80± 21.34 | 150.30± 15.98 | |
| SHL-ODT | 6.30±1.04 | 127.00± 10.64* | 0.53±0.39 | 236.30± 26.76* | 282.90± 54.60* | ||
| SHL-DT | 5.88±0.63 | 104.20± 51.71* | 0.89±0.67 | 239.30± 17.02* | 314.70± 85.72* | ||
| 连翘酯苷A | SHL-OT | 8.82±1.51 | 44.19± 32.49 | 1.33±0.29 | 131.20± 9.26 | 157.30± 51.38 | |
| SHL-ODT | 6.48±4.25 | 94.74± 40.76 | 0.39±0.53 | 229.50± 24.82** | 239.80± 17.29 | ||
| SHL-DT | 7.52±0.99 | 107.30± 27.00 | 0.25±0.22 | 258.60± 22.48** | 328.50± 54.14* | ||
| 木犀草苷 | SHL-OT | 3.22±0.30 | 7.35± 3.01 | 1.36±1.49 | 40.43± 19.27 | 78.69± 50.54 | |
| SHL-ODT | 2.67±0.81 | 25.58± 22.15 | 0.36±0.24 | 73.56± 20.38* | 130.60± 71.44 | ||
| SHL-DT | 2.55±0.75 | 27.70± 9.72 | 0.36±0.24 | 77.81± 4.91* | 118.30± 56.80 | ||
| 黄芩苷 | SHL-OT | 10.85±1.36 | 1 593.00± 243.40 | 1.33±0.58 | 4 171.00± 745.60 | 4 306.00± 741.80 | |
| SHL-ODT | 9.27±1.54 | 2 812.00±1 170.00 | 0.53±0.46 | 8 635.00±1 611.00** | 9 036.00±2 168.00* | ||
| SHL-DT | 9.92±0.80 | 2 490.00± 517.80 | 0.56±0.42 | 9 909.00±1 143.00** | 10 133.00±1 394.00** | ||
| 连翘苷 | SHL-OT | 2.69±0.49 | 41.47± 9.21 | 1.33±0.29 | 231.90± 85.36 | 310.70± 127.10 | |
| SHL-ODT | 2.49±1.18 | 101.20± 13.12* | 0.92±0.15 | 435.60± 108.50* | 695.50± 107.20** | ||
| SHL-DT | 2.39±1.01 | 94.06± 7.06* | 0.75±1.08 | 491.90± 44.62** | 589.90± 112.30* | ||
| 千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛苷 | SHL-OT | 6.84±1.38 | 81.05± 36.61 | 1.25±0.66 | 343.80± 24.95 | 355.20± 31.99 | |
| SHL-ODT | 6.34±1.20 | 97.87± 19.80 | 0.75±1.08 | 508.10± 9.03* | 545.50± 8.71* | ||
| SHL-DT | 6.81±0.64 | 102.90± 29.76 | 0.64±0.43 | 569.70± 133.60* | 587.90± 154.40* | ||
| 注：与 SHL-OT 组相比，*P<0.05，**P<0.01。 | |||||||
速释型固体口服制剂的药代动力学设计，核心目标在于系统评价该类制剂在口服后能否快速崩解、有效溶出，并促使药物活性成分被迅速吸收进入体循环，从而真实反映其绝对或相对生物利用度[20-21]。本研究聚焦于经典中药复方双黄连，将其制备成两种不同的速释固体剂型：SHL-ODT与SHL-DT，旨在探索通过剂型改良提升其活性成分口服生物利用度的可行性。这两种剂型均在一定程度上结合了传统片剂便于携带与液体制剂易于服用的优点，但其作用机制与崩解场景存在差异。具体而言，分散片可在给药前于水中迅速分散形成均匀混悬液，而ODT则能在口腔内接触唾液后极短时间内崩解，无需用水辅助吞咽。这不仅提升了患者用药的顺应性，更可能通过口腔黏膜的初步吸收或胃内的快速溶出，缩短药物到达吸收部位的时间，进而有望加速起效并提高生物利用度[22]。在本研究中，观察到所制备的SHL-DT在体外溶出度实验中表现出比SHL-ODT更快的药物释放行为。
本研究采用液质联用技术对双黄连中成分进行定性鉴定，为后续药代动力学定量成分的选择奠定实验基础。制备并得到SHL-ODT和SHL-DT，并对其进行制剂学表征，两种制剂均符合2020年版《中国药典》对相关剂型要求的规定。并对两种双黄连口服固体速释制剂进行药代动力学评价，与SHL-OT相比，所制备的两种口服固体速释制剂可以迅速崩解，快速溶出，进而进入体内吸收，显著提高生物利用度，为中药复方双黄连速释制剂的设计提供参考。
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