沉香曲首载于《饮片新参》^[1]，是由沉香等24味中药配伍小麦标准粉制成的饮片，其最具特征的性质为独特的香气^[2]。该药兼具理气健胃与疏肝解郁的双重作用，针对表邪未消兼有肝胃郁阻、胁肋疼痛等病症^[3]。《饮片新参》^[1]记载了其性味与功能主治，并明确指出“阴虚内热者慎用”，但未载其组方信息。郑显庭在《丸散膏丹集成》^[4]中收录的沉香曲则载明其完整处方，包括沉香、木香、柴胡等共24味药材，并列明功能主治、制备方法与用法。

沉香曲组方中使用的葛根含有葛根素等黄酮类成分。葛根素药理作用广泛，主要涉及心脑血管系统保护、免疫调节、降血糖、抗炎及清热等作用^[5-6]。目前，沉香曲的质量标准研究仍相对薄弱，部颁标准与各地方标准在处方组成上存在明显差异，尤其在是否加入六神曲这一问题上表现突出。例如，《卫生部药品标准中药成方制剂第十七册》^[7]和《天津市中药饮片炮制规范（2022年版）》^[8]收载的沉香曲处方中均未加入六神曲，两者主要区别在于葛根用量不同；而《北京市中药饮片炮制规范（2023年版）》^[9]《安徽省中药饮片炮制规范（2019年版）》^[10]等地方标准则明确列有六神曲。此外，《卫生部药品标准中药成方制剂第十七册》^[7]《天津市中药饮片炮制规范（2022年版）》^[8]《安徽省中药饮片炮制规范（2019年版）》^[10]等标准中虽均收载沉香曲，但其质量标准仅涵盖性状、炮制、处方、制法等内容，未规定有效成分的定性或定量检测项目。《北京市中药饮片炮制规范（2023年版）》^[9]中沉香曲的组方与部颁标准及天津市标准差异较大，由沉香、檀香、厚朴和六神曲组成，并在此基础上增加了显微鉴别、和厚朴酚与厚朴酚的薄层鉴别、水分、总灰分等检测项目。然而，仅凭现有指标仍难以全面反映沉香曲饮片的质量水平。

目前针对沉香曲的研究较少，仅见部分成分的初步含量测定报道^[11]，现有研究仍缺乏系统的化学成分分析及深入的理化与薄层鉴别分析。因此，为完善沉香曲的质量标准体系，本研究结合网络药理学方法预测沉香曲的潜在质量标志物，并通过薄层鉴别、常规检查项（水分、总灰分）测定以及有效成分含量分析等多维度研究，建立科学完善的质量评价方法，为保障其临床用药的安全有效提供技术支撑。

1 仪器与材料 1.1 仪器

ATS4型全自动点样机（瑞士CAMAG公司）；TLC Visualizer 2型薄层色谱数码成像系统（瑞士CAMAG公司）；LC-20AT高效液相色谱仪（日本株式会社岛津制作所）；Mettler ME204型万分之一天平、MS 105DU型十万分之一天平（瑞士Mettler Toledo公司）；DL-720B型超声波清洗机（上海之信仪器有限公司）；Centrifuge 5424R型台式离心机（德国Eppendorf公司）；UPR-11-15TNZP型超纯水仪（四川优普超纯科技有限公司）；VOS-310C型真空定温干燥器（上海爱朗仪器有限公司）。

1.2 药品与试剂

葛根素（批号：110752-202217，纯度：96.8%）、紫花前胡苷（批号：111821-201604，纯度：99.6%）均购自中国食品药品检定研究院；甲醇（分析纯，天津康科德科技有限公司）；三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮（分析纯，天津渤化化学试剂有限公司）；水（实验室自制超纯水）；甲醇、乙腈[色谱纯，西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司]；甲酸（色谱纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）。实验所使用的硅胶G板分别购自烟台市化学工业研究所（批号：2025-06-20）、青岛海洋化工有限公司（批号：2025-05-06）、Merck KGaA公司（批号：HX15271026）以及湖南比克曼控股有限责任公司（批号：2025-03-05）。沉香曲样品共计8批，其中1批（CXQ0001）由津药达仁堂（天津）中药饮片有限公司提供，3批（CXQ0002~CXQ0004）购自化州市华逸中药饮片有限公司，其余4批（CXQ0005~CXQ0008）为实验室严格依据《天津市中药饮片炮制规范》（2022年版）要求制备。所有样品均保存于实验室。

2 方法与结果 2.1 网络药理学研究 2.1.1 化合物靶点预测

本研究以沉香曲组方所含的24味药材（沉香、厚朴、砂仁、青皮、葛根、桔梗、红谷芽、枳壳、降香、木香、郁金、防风、前胡、槟榔、藿香、甘草、柴胡、白蔻、麦芽、乌药、陈皮、白芷、檀香、羌活）为起点，以其在《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》）2025年版中收载的含量测定及薄层鉴别指标成分为基础，进行潜在活性成分的筛选。筛选过程分为3步：首先，依据药典成分进行初步选取；其次，结合沉香曲理气健胃、疏肝解郁的功效，重点聚焦于沉香、木香、檀香、藿香、砂仁、陈皮、枳壳等芳香理气药及柴胡、郁金等疏肝解郁药中的相关成分（如乙酸龙脑酯、木香烃内酯、槟榔碱、百秋李醇等挥发性成分）；最后，以口服生物利用度（OB>10%）为标准进一步筛选，得到最终的分析成分。在此基础上，利用SwissTargetPrediction联合TCMSP数据库对候选化合物进行蛋白质靶点预测分析，所有靶点名称均通过UniProt数据库（https://www.uniprot.org）进行规范化的统一，以支持后续薄层鉴别与含量测定研究中的活性成分筛选。

2.1.2 蛋白质互作（PPI）网络的构建

使用STRING 12.0数据库（http://string-db.org/cgi/input.pl）进行PPI分析，设置物种为“Homo sapiens”，蛋白交互分数（interaction score）阈值大于0.4，其余参数保持默认值。获取信息后，利用Cytoscape 3.9.1软件进行网络可视化，并借助其“Network Analyzer”功能进行拓扑属性分析。核心靶点的筛选标准为度值（degree）大于两倍中位数、介数中心性（betweenness centrality）和接近中心性（closeness centrality）均大于中位数。度值作为节点大小的依据，度值越大，节点越大见开放科学（资源服务）标识码（OSID）。最终明确筛选出19个关键靶点，具体信息见表 1。

2.1.3 基因本体（GO）功能富集分析和京都基因和基因组百科全书（KEGG）通路富集分析

通过DAVID数据库6.8（https://david.ncifcrf.gov/）对19个核心靶点进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析，以P≤0.01显著性阈值筛选功能和通路条目。GO分析共获得57个条目，包括生物过程（BP）20条，细胞组成（CC）17条，分子功能（MF）20条；KEGG分析富集到116条通路，选取部分显著条目绘制气泡图进行可视化。GO和KEGG分析结果见图 1。

GO富集分析显示，在生物过程（BP）中，核心靶点显著富集于RNA聚合酶Ⅱ对“pri-miRNA”转录的正向与负向调控、细胞对化学应激和脂多糖的反应、凋亡信号通路调控，以及对细菌来源分子的响应等过程；在细胞组成（CC）方面，靶点主要分布于膜筏、膜微区、RNA聚合酶Ⅱ转录调控复合体、转录调控复合体、内吞囊泡膜及转录前起始复合体等结构，提示其在转录调控和膜信号转导中的关键作用；在分子功能（MF）层面，核心靶点表现出对DNA结合转录因子、核受体、细胞因子受体以及激酶活性的结合能力，体现了其在转录调控、信号转导及代谢调控中的多重角色。

KEGG通路富集分析（图 1B）从全部富集通路中选取前10条进行展示。结果显示，核心靶点显著富集于乙型肝炎、人类巨细胞病毒感染、Epstein-BC病毒（EBV）感染、卡波西肉瘤相关疱疹病毒感染、人类免疫缺陷病毒1型感染及麻疹病毒感染等多种病毒相关通路；此外，还涉及糖尿病并发症相关的高级糖基化终末产物受体（AGE-RAGE）信号通路、炎症相关的肿瘤坏死因子（TNF）信号通路等重要疾病与调控通路，提示这些靶点在病毒感染、免疫炎症反应及代谢性疾病发展中可能发挥关键作用。此外，本研究从全部116条通路中选取与沉香曲功效相关性最高的前10条进行分析（图 1C），为质量标志物的选择提供现代药理学靶点依据，其作用核心在于通过调节胃肠动力、抑制炎症、调控代谢与应激反应，共同阐释沉香曲“理气健胃、疏肝解郁”的传统功效。具体而言，葛根素可能通过调节钙信号、环磷酸腺苷（cAMP）/蛋白激酶G（PKG）等通路直接作用于胃肠平滑肌，同时抗炎并改善胰岛素抵抗，从而综合调节胃肠动力与肝郁相关的炎症与代谢紊乱；紫花前胡苷则主要靶向核因子-κB（NF-κB）、TNF等关键炎症通路发挥抗炎作用；柴胡皂苷a作为疏肝代表性成分，其保肝、抗炎作用与调控丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、Janus激酶（JAK）-信号转导及转录激活因子（STAT）等肝郁相关应激炎症通路密切相关；而厚朴酚不仅能调节胆碱能信号促进胃肠动力，同样对NF-κB等炎症通路具有抑制作用。因此，上述4种成分分别从调节胃肠运动、抑制炎症、改善代谢与应激等不同层面，协同构成了复方质量标志物筛选的药效学网络依据。

2.1.4 构建“成分-靶点-通路”网络

通过Cytoscape 3.9.1平台，将筛选得到的葛根素、紫花前胡苷、柴胡皂苷a及厚朴酚4个化合物，与其对应的19个重要靶蛋白及10条代谢通路进行关联，构建了沉香曲“成分-靶点-通路”网络（图 2）。该网络直观展示了各成分、靶点与通路之间的相互关系，体现了活性成分可通过作用于多靶点、调控多通路发挥协同治疗作用，与中药“多组分-多靶标”的整体作用特征相符。基于上述网络药理学分析所确定的关键化合物，笔者进一步筛选了相应的指标成分。其中，选择葛根素作为含量测定指标，主要基于其在沉香曲HPLC色谱图中峰面积最大，峰形对称且分离度优良，因此确定为含量测定的指标成分；选择紫花前胡苷作为薄层鉴别指标，主要因其在薄层色谱中呈现清晰斑点且分离效果良好；而柴胡皂苷a及厚朴酚由于在薄层色谱中未能显示出清晰斑点，因此不适合作为指标成分。

2.2 薄层鉴别 2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取紫花前胡苷对照品0.50 mg，置5 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制得浓度为0.10 μg/mL的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备

取各批次沉香曲粉末（过3号筛）约0.5 g，置具塞锥形瓶中，加50%甲醇20 mL，超声处理（功率600 W，频率50 kHz）20 min，离心后取全部上清液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，得供试品溶液。

2.2.3 薄层展开条件耐用性实验

参照《中国药典》2025年版四部通则薄层色谱法（0502）进行操作，分别吸取上述两种溶液各2 μL，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（7∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下（365 nm）下检视。由图 3可知，在不同批次沉香曲供试品色谱中，与紫花前胡苷对照品色谱相应的位置上均显相同的亮蓝色荧光斑点。使用烟台市化学工业研究所预制板分别在25 ℃、40%及高温高湿（36 ℃、80%）条件下，斑点分离度均符合要求。

2.3 检查项研究 2.3.1 水分

按照《中国药典》2025年版四部通则0832项下水分测定法第二法测定8批样品水分，结果分别为9.6%、8.8%、8.1%、7.3%、10.0%、8.8%、8.8%、9.0%，平均测定值为8.8%。以平均值的120%设定限度为10.56%，故暂定本品水分不得过11.0%。

2.3.2 总灰分

按照《中国药典》2025年版四部通则2302项下总灰分测定法测定8批样品总灰分，结果分别为3.1%、3.7%、3.6%、3.6%、3.0%、3.0%、3.0%、3.0%，平均测定值为3.3%。以平均值的120%设定限度为3.96%，故暂定本品总灰分不得过4.0%。

2.4 葛根素的含量测定 2.4.1 对照品溶液的制备

精密称取葛根素对照品8.02 mg，置10 mL量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得浓度为802 μg/mL的对照品贮备液。将该贮备液用50%甲醇逐级稀释2、4、8、16、32、64倍，得系列浓度对照品溶液。

2.4.2 供试品溶液的制备

取沉香曲粉末（过3号筛）约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇20 mL，密塞，称定质量，超声处理（功率600 W，频率50 kHz）20 min，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，过0.22 μm微孔滤膜，即得。

2.4.3 色谱条件与系统适应性实验

色谱柱为Shim-pack GIST C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液（25∶75）；检测波长为250 nm；柱温为40 ℃；进样量为10 μL。理论板数按葛根素峰计算应不低于4 000。对照品及供试品溶液的HPLC色谱图见图 4。

2.4.4 线性关系

精密吸取“2.4.1”项下系列浓度对照品溶液各10 μL，按“2.4.3”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以葛根素浓度（X，μg/mL）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，得回归方程为Y=40 983 899X- 36 917（R²>0.999 9），表明葛根素在12.5~802.0 μg/mL浓度范围内线性关系良好。以信噪比3∶1的对照品溶液进样量确定检出限，检出浓度为0.153 1 μg/mL。以信噪比10∶1的对照品溶液进样量确定定量限，定量浓度为0.463 0 μg/mL。

2.4.5 方法学考察 2.4.5.1 精密度实验

取沉香曲粉末（CXQ0004），按“2.4.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.4.3”项下色谱条件连续进样测定6次，计算各含量值的相对标准偏差（RSD）为0.7%，表明仪器日内精密度良好；另取同一供试品溶液，连续3 d重复进样6次，计算各含量值的RSD为0.6%，表明该仪器日间精密度良好。

2.4.5.2 稳定性实验

取同一供试品溶液（CXQ0004），分别于0、2、4、6、8、10、12、24 h进样测定，计算各含量值的RSD为0.2%，表明供试品溶液室温条件下放置24 h内稳定性良好。

2.4.5.3 重复性实验

取同一批次沉香曲粉末（CXQ0004）0.5 g共6份，按“2.4.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.4.3”项下色谱条件进样分析，计算得到6份样品中葛根素的平均含量为0.310%，测定结果的RSD为1.0%，表明该方法的重复性良好。

2.4.5.4 加样回收率实验

取已知葛根素含量的沉香曲样品粉末（CXQ0004，水分7.3%，含量0.305%），每份约0.25 g，精密称定，分别加入与样品中葛根素质量相当的对照品溶液，按“2.4.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.4.3”项下色谱条件测定，计算回收率。结果显示，葛根素的加样回收率为97.90%~104.75%，RSD为1.1%，表明该方法的准确度良好。

2.4.5.5 耐用性实验

取同一供试品溶液（CXQ0004），分别于3种不同品牌仪器及色谱柱条件下测定，葛根素含量RSD分别为1.9%（不同仪器）和3.6%（不同色谱柱），表明仪器和色谱柱的变动对测定结果影响较小，方法耐用性良好。

2.5 样品含量测定

取8批沉香曲样品，分别制备供试品溶液并进样分析，结果见表 2。8批样品中葛根素的平均含量为0.246%。结合性状、水分、总灰分等检测结果均未见异常，以平均值的80%设定限度为0.197%，暂定本品按干燥品计算，含葛根素（C₂₁H₂₀O₉）不得少于0.2%。

3 讨论

为建立沉香曲饮片的质量标准，本研究综合运用网络药理学与高效液相色谱技术进行系统研究。网络药理学分析显示，沉香曲中葛根素、紫花前胡苷等成分可能通过作用于TNF、STAT3、AKT1等关键靶点，在调控病毒感染、免疫炎症反应、代谢性疾病及肿瘤发生过程中发挥潜在生物作用。在现有标准基础上，本研究新增了水分、总灰分、薄层鉴别及葛根素含量测定等项目，并制定了相应的限度要求。通过整合网络药理学、薄层色谱与高效液相色谱技术，不仅实现了对沉香曲饮片的定性鉴别与成分定量分析，还可通过水分与总灰分检测有效监控其霉变风险与非法添加行为，为该药的临床应用的安全性与有效性提供科学依据。

在薄层色谱条件优化过程中，参考2025年版《中国药典》^[12]中羌活的相关方法，对三氯甲烷-甲醇（8∶2）、乙酸乙酯-甲醇（8∶2）、乙酸乙酯-丙酮-甲酸（6∶3∶1）三种展开体系进行考察，初步筛选显示三氯甲烷-甲醇（8∶2）体系分离效果最佳。经进一步展开剂比例优化，最终确定三氯甲烷-甲醇（7∶2）为最佳展开条件，该体系下样品条带分离度良好，对照品比移值适宜。随后对提取溶剂（甲醇、乙醇、乙酸乙酯）、点样浓度（0.125 g/mL、0.25 g/mL、0.5 g/mL）和点样量（2 μL、3 μL、4 μL）进行优化，结果表明以甲醇为提取溶剂、点样浓度0.125 g/mL、点样量2 μL时薄层分离效果最佳。

在提取方式优化实验中，取沉香曲样品粉末（编号CXQ0004）约0.5 g，分别考察了不同甲醇浓度（100%、75%、50%、25%）和溶剂体积（10 mL、20 mL、30 mL）对葛根素提取效率的影响。结果表明，以50%甲醇20 mL为溶剂，在40 ℃下超声提取30 min时，葛根素的提取效率最高。进一步在固定溶剂为40倍量50%甲醇的条件下，比较了不同超声温度（30 ℃、40 ℃、50 ℃）和加热回流等提取方式，以及不同提取时间（10 min、20 min、30 min）的影响。最终确定以50%甲醇20 mL在40 ℃下超声提取20 min为最佳提取条件，该条件下葛根素提取效率最高。

在色谱条件优化方面，比较了甲醇-0.1%甲酸和乙腈-0.1%甲酸两种流动相系统。结果显示，甲醇-0.1%甲酸溶液系统理论板数更高，分离效果更优，故选用甲醇-0.1%甲酸溶液作为流动相。最终确定的流动相组成为甲醇-0.1%甲酸（25∶75，V/V），在此条件下葛根素的保留时间约为15 min，与相邻色谱峰实现基线分离，满足分析要求。

综合分析认为，后续研究应关注原料药材的基原鉴定、质量控制和炮制工艺等关键因素对沉香曲质量的影响，以进一步完善其质量标准。鉴于沉香曲在不同地方标准中组方药材及其用量存在显著差异，建议统一并优化处方配比。此外，应结合中医药临床经验及组方药材的药效特点，建立适宜的动物模型与细胞模型，通过体内外实验明确沉香曲发挥药效的物质基础及作用机制。通过上述研究，可进一步提升沉香曲的质量标准，明确其质量标志物，建立具备专属性和科学性的评价体系，为沉香曲的临床安全用药与合理应用提供依据。