淫羊藿来源为小檗科植物淫羊藿、箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿或朝鲜淫羊藿的干燥叶。具有补肾壮阳、祛风除湿、强筋键骨的功效。炙淫羊藿所用的油为羊油，采用气相色谱-质谱联用法（GC-MS法）分析，羊油中大致含有16种脂肪酸，油酸甲酯为主要的不饱和脂肪酸。硬脂酸甲酯和棕榈酸甲酯为主要的饱和脂肪酸^{[1, 2, 3, 4]}。现代药理研究表明，其含有的黄酮类成分对内分泌系统、心血管系统、免疫系统具有不同程度的药效作用。大鼠淫羊藿苷固体脂质体纳米粒（Ica-Sol）组织分布研究表明，各个组织相对分布比例为：心4%；肝13%；脾17%；肺29%；肾79%；脑12%。肾脏中Ica-Sol的含量高于其他组织，具有明显的肾靶向性^{[5, 6, 7]}。淫羊藿苷（Ica）油炙后在溶液中的存在状态可能发生改变，从而改变其体内分布。本文探究羊油中3种主要脂肪酸单一和不同比例配比处方模拟油炙后淫羊藿苷水煎液中是否可形成纳米级给药系统及形成粒子中各成分是否有变化，从而分析各个脂肪酸对淫羊藿苷纳米粒子的影响。

高效液相色谱仪Thermo Ultimate 3000，A S20500AT超声波清洗器（天津奥特赛恩斯仪器有限公司），85-2型恒温磁力加热搅拌器（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司），800 离心机（常州国华电器有限公司），ZetaPLUS粒径电位测定仪（美国Brookhaven仪器公司），Diamonsilc18（250 mm×4.6 mm，5 μm迪马科技有限公司），乙腈（色谱纯 天津市康科德科技有限公司），纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）。

淫羊藿苷（批号HK20091018陕西慧科科技有限公司），淫羊藿苷对照品（批号110737-200414中国药品生物制品鉴定所），SepadexG-50葡聚糖凝胶（50~150 μm，Sigma公司），油酸甲酯（批号 120925天津光复精细化工研究所），硬脂酸甲酯（批号100904天津光复精细化工研究所），棕榈酸甲酯（批号112390梯希爱化成工业有限公司），胆固醇（批号 2003532 Solarbio）。

色谱柱为Diamonsil-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm，Dikma），流动相乙腈-水（30∶70），流速：1 mL/min，检测波长：270 nm，进样体积：20 μL，柱温：室温。

取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，放入容量瓶，用甲醇配制成质量浓度为2.2 μg/mL的对照品溶液。

取淫羊藿苷纳米粒溶液适量，通过葡聚糖凝胶柱分离，洗脱液加等体积甲醇超声破乳，过0.45 μm滤膜既得。

精密吸取淫羊藿苷（Ica）对照品溶液按体积法进样1、2、5、8、10 μL在上述色谱条件下进行测定，以峰面积（A）对浓度（C）进行线性回归，得标准曲线方程为A=0.029 C-0.007 7（r=0.999 9，n=5），线性范围为0.002~0.044 μg。

分别配制高、中、低3个不同浓度的对照品溶液各3份，注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下进行测定。

精密制备同一批样品，按制备方法分别制备6份样品溶液，进行实验，测定峰面积，计算RSD值为1.8%，符合实验要求。

取葡聚糖凝胶G-50适量加蒸馏水膨胀过夜，将膨胀后的凝胶加入层析柱中，制成高23 cm，直径2 cm的凝胶柱，用蒸馏水冲洗数次备用。制得的样品采用湿法加样法加入，待加样后，用蒸馏水慢慢洗脱，并控制洗脱速率，以1 mL/min为流速进行药物含量监控，流出液分别用等量甲醇破乳，测定药物含量，分别观察药物出峰大小及出现时段，绘制流出体积-药物浓度曲线，以洗脱液体积对吸光度作图，绘制洗脱曲线。

取制备的样品，采用ZetaPLUS粒径电位测定仪测定其粒径、粒度分布及电位。

根据文献参考和预实验筛选，确定优化的条件为煎煮温度80~100 ℃，煎煮时间30~50 min，加水倍数5~10倍，离心转速4 000~8 000 r/min。以在统计学P＜0.05时（有显著差异）粒子含药量和粒径为指标。

见图 1。

图 1 淫羊藿苷对照品溶液HPLC色谱图

图选项

见表 1。由表 1可知，该方法精密度RSD均小于2%，符合实验要求。

见图 2。由图 2可知，葡聚糖凝胶可分离淫羊藿苷纳米粒溶液，且粒子收集从洗脱液流出的5 mL起至20 mL（共15 mL）；收集游离药溶液从洗脱液流出的20 mL至60 mL（共40 mL）。

图 2 葡聚糖凝胶分离实验

图选项

见表 2。由结果可知，最佳实验条件为煎煮温度90 ℃，加水倍数为5倍，离心条件为4 000 r/min，煎煮时间为30 min。

淫羊藿炮制方法起源于南北朝时炮制专论《雷公炮炙论》，此后，羊油炙淫羊藿沿用至今。生淫羊藿用于祛风湿，油炙之后才有补肾壮阳之功效。为了更加直观的探究这一变化，采用单体炮制的方法进行实验。

根据参考文献^{[8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15]}分别使用羊油中3种主要脂肪酸：油酸甲酯、棕榈酸甲酯、硬脂酸甲酯，依照羊油中不同比例与胆固醇组成油相，见表 3。油相与淫羊藿苷单体（1∶7）在120 ℃下按照药典炮制方法进行炮制操作，冷却备用。将各组混合物与水（1∶5）在最佳煎煮条件下煎煮，放凉后4 000 r/min离心后即得。

通过排阻葡聚糖凝胶G-50对水煎液中的纳米粒子分离。得到的粒子破乳后在相同色谱条件下测定粒子含药量及游离药物含量得表 4。

参照中国药典附录，分别配制好模拟胃液和模拟肠液。煎煮液与体液（1∶2）在37 ℃下搅拌孵育2 h，4 000 r/min离心后即得。按上述分离方法分离，破乳后在HPLC色谱条件下测定粒子含药量及游离药物含量，见表 5、表 6。

由实验结果可知，通过粒径电位测定表明，溶液中含有1μm下的给药系统，使用3种脂肪酸有形成纳米给药系统的可能性，且胆固醇的比例含量可能会影响纳米粒的形成。进而推断，炙淫羊藿自然煎煮时，可能会有纳米级给药系统形成趋势。

根据模拟煎煮结果可知，有棕榈酸甲酯的实验组（3,5）粒径相对较小，粒子含药量明显高于其他组。棕榈酸甲酯和油酸甲酯的混合相（5组）含药量略高于单用棕榈酸甲酯（3组）；同样，硬脂酸甲酯和油酸甲酯混合相（4组）含药量也略高于单用硬脂酸甲酯（2组）。这也表明棕榈酸甲酯，可以作为一种脂质材料单独使用，且与油酸甲酯配合使用时，效果更好。

在有体液参与的时候，各组出现了相同的趋势，粒径降低且载药量有小幅度的升高，尤其是在肠液中。这也在另一角度上说明，油炙淫羊藿煎煮液在体内可能会受到体液的影响形成纳米级粒子，并作用于肾脏，从而发挥补肾壮阳作用。

随着中医药越来越被世界所接受，中药的剂型越来越广泛，现代给药系统越来越灵活。羊油炙淫羊藿的炮制方法经过长期的发展，积累了许多丰富的经验。传统经验想要与现代药物发展方向充分结合，改变给药系统是很有效，也是很直接的办法。目前油炙淫羊藿产生的药效还有很多潜在价值尚未明确，不饱和脂肪酸由于有双键有的甚至具有多达6个双键，因而具有许多饱和脂肪酸没有的生物活性，很有药用价值^{[16, 17, 18, 19, 20, 21]}。中药的炮制理论对现代新型给药系统提升至更高水平，和现代药物制剂接轨有很大推动作用，对中医药面向世界的发展有一定的帮助和借鉴意义。