2016, Vol. 35文章信息
- 张青霞, 张德芹, 黄春丽, 文静
- ZHANG Qing-xia, ZHANG De-qin, HUANG Chun-li, WEN Jing
- 和颜®坤泰胶囊对初老大鼠神经递质的影响
- Effects of Heyan Kuntai capsule on monoamine neurotransmitter levels in presenile rats
- 天津中药大学学报, 2016, 35(3): 173-175
- Journal of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, 2016, 35(3): 173-175
- http://dx.doi.org/10.11656/j.issn.1673-9043.2016.03.07
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文章历史
收稿日期: 2016-02-28
中枢内神经递质去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）及其相关物质5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）、色氨酸、酪氨酸等参与中枢神经系统中多种生理过程，分析单胺类神经递质及其相关物质能为多种疾病的治疗提供重要依据[1-4]。在衰老的过程中，脑内单胺类神经递质的代谢发生紊乱，出现NE、DA、5-HT含量的下降，提示单胺类神经递质的平衡遭到破坏，这与一些老年性疾病如帕金森病、老年痴呆及脑功能的减退有关[5]。
和颜坤泰胶囊由6味中药组成，是在东汉医圣张仲景的《伤寒论》中记载的“黄连阿胶汤”的基础上去鸡子黄，重用熟地黄、加茯苓，减少了黄连的用量，具有滋阴清热，安神除烦的功效。6药合用，起到滋阴养血，补精益髓，交通心肾，调节阴阳平衡的作用。文章基于前期实验[6-7]，通过对初老大鼠血清中NE、DA、5-HT、5-HIAA及血浆中促肾上腺皮质激素（ACTH）、β-内啡肽（β-EP）含量的检测，探讨和颜坤泰胶囊对初老大鼠神经内分泌的调节。
1 实验材料 1.1 动物2月龄雄性SD大鼠21只，2月龄雌性SD大鼠102只，体质量（220±20） g，4月龄雌性SD大鼠20只，体质量（250±20） g，均由北京维通利华动物实验中心提供，合格证编号：SCXK（京）2002-0003，饲养于天津中医药大学实验动物饲养中心。
1.2 药物和颜坤泰胶囊（贵阳新天药业股份有限公司,批号130107），莉芙敏（德国夏普天然药物制药公司，批号200781），补佳乐（戊酸雌二醇，Delpharm LilleS.A.S生产,由拜耳医药保健有限公司广州分公司分包装,批号106A2）。
1.3 试剂NE试剂盒（批号L140926718），DA试剂盒（批号L141021448），5-HT试剂盒（批号L140908201），5-HIAA试剂盒（批号L141021430），ACTH试剂盒（批号L140826406），β-EP试剂盒（批号L140811158），以上试剂盒均由Uscn Life science Inc公司提供。
1.4 仪器Enspire型多功能酶标仪（美国Perkin Elmer公司），LDZ5-2低速自动平衡离心机（北京京立离心机有限公司），MDF-382E型-80℃低温冰箱（日本Sanyo公司）。
2 实验方法 2.1 模型建立选取2月龄雌性和雄性SD大鼠，雌雄合笼交配，待雌鼠怀孕并自然生产后，选取产后雌性SD大鼠80只继续分笼饲养至13月龄，应用阴道脱落细胞涂片连续观察15 d，选择动情周期紊乱的大鼠作为初老大鼠模型，另选取4月龄动情周期规律的雌性SD大鼠作为青年对照组[8]。
2.2 分组给药筛选成模大鼠48只，采用随机区组法分为6组（每组8只），分别为模型对照组，莉芙敏组（60 mg/kg）[9]，补佳乐组（0.2 mg/kg），和颜坤泰胶囊高、中、低剂量组（8、4、2 g/kg），另外设置青年对照组（8只）。各组分别灌胃给药，灌服体积为10 mL/（kg·d），青年对照组和模型对照组灌服同体积蒸馏水。
2.3 标本采集给药90 d后大鼠禁食（不禁水）8 h，3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉，腹主动脉采血，离心15 min（3 500 r/min），分离血清；另取2 mL全血分别注入预先加有10%EDTA·Na2 30 μL、抑肽酶20 μL和预先加有肝素钠60 μL的试管中，混匀并离心，置于-80 ℃冰箱冷贮备用。
2.4 检测方法 2.4.1 一般情况观察实验期间观察动物精神、活动、毛色情况。
2.4.2 血清中及血浆中相关指标的检测采用酶联免疫吸附法（ELISA法）检测血清中NE、DA、5-HT、5-HIAA含量，血浆中ACTH、β-EP含量，利用多功能酶标仪读取450 nm波长下吸光度（A）并计算其含量。
2.5 统计学处理采用SPSS 19.0软件分析，实验数据均以均数±标准差（x± s）表示，组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较若方差齐采用LSD法，若方差不齐采用Dunnett’s T3法，P < 0.05为差异有统计学意义。
3 实验结果 3.1 一般指征与青年对照组比较，模型对照组大鼠神态萎靡，活动较少，毛发脱落较明显，色泽暗发黄；莉芙敏组、补佳乐组及和颜坤泰胶囊中、低剂量组大鼠上述体征与模型对照组比较均有所改善，且莉芙敏组、和颜坤泰胶囊低剂量组效果较明显；青年对照组大鼠较其余各组大鼠摄食量大。
3.2 各组大鼠血浆ACTH、β-EP含量的变化与青年对照组比较，模型对照组ACTH含量显著上升（P < 0.01）、β-EP含量显著下降（P < 0.01）；与模型对照组比较，莉芙敏组、补佳乐组ACTH含量显著下降（P < 0.01），β-EP含量显著上升（P < 0.01），和颜坤泰胶囊低剂量组ACTH含量显著下降（P < 0.01），中、低剂量组β-EP含量显著上升（P < 0.01，P < 0.05）。见表 1。
| 组别 | n | 剂量 (g/kg) | ACTH (ng/L) | β-EP (ng/L) |
| 青年对照组 | 8 | - | 54.61±4.24 | 33.36±7.57 |
| 模型对照组 | 8 | - | 85.67±10.57## | 16.32±1.84## |
| 莉芙敏组 | 8 | 6×10-2 | 58.39±7.20** | 28.60±5.53** |
| 补佳乐组 | 8 | 2×10-4 | 72.13±14.33* | *22.96±2.50** |
| 和颜坤泰胶囊高剂量组 | 8 | 8 | 80.55±7.50 | 18.37±2.18 |
| 和颜坤泰胶囊中剂量组 | 8 | 4 | 76.28±9.38 | 21.20±2.60* |
| 和颜坤泰胶囊低剂量组 | 8 | 2 | 63.69±10.13* | *24.11±3.54** |
| 注：与模型对照组比较，*P < 0.05，**P < 0.01；与青年对照组比较，#P < 0.05，##P < 0.01。 | ||||
与青年对照组比较，模型对照组NE、DA含量显著降低（P < 0.01），5-HT、5-HIAA含量显著上升（P < 0.01）；与模型对照组比较，莉芙敏组NE、DA含量显著上升（P < 0.01），补佳乐组NE含量显著上升（P < 0.01），莉芙敏组、补佳乐组5-HT、5-HIAA含量显著降低（P < 0.01），和颜坤泰胶囊中、低剂量组NE含量显著上升（P < 0.01），5-HT、5-HIAA含量显著降低（P < 0.01，P < 0.05）。见表 2。
| 组别 | n | 剂量 (g/kg) | NE (ng/L) | DA (ng/L) | 5-HT (μg/L) | 5-HIAA (μg/L) |
| 青年对照组 | 8 | - | 38.49±3.74 | 516.52±44.74 | 391.96±20.32 | 1.73±0.11 |
| 模型对照组 | 8 | - | 22.97±0.76## | 413.15±57.34## | 519.58±28.37## | 3.36±0.57## |
| 莉芙敏组 | 8 | 6×10-2 | 35.24±4.19** | 483.97±52.53** | 420.93±42.53** | 1.84±0.18** |
| 补佳乐组 | 8 | 2×10-4 | 31.88±2.91** | 425.91±35.53 | 438.38±28.49** | 2.06±0.20** |
| 和颜坤泰胶囊高剂量组 | 8 | 8 | 25.59±4.10 | 420.95±34.82 | 498.51±54.21 | 2.95±0.73 |
| 和颜坤泰胶囊中剂量组 | 8 | 4 | 30.06±3.49** | 421.72±42.46 | 446.38±38.61* | 2.42±0.33* |
| 和颜坤泰胶囊低剂量组 | 8 | 2 | 33.85±5.04** | 432.13±44.12 | 432.21±26.71** | 2.02±0.20** |
| 注:与模型对照组比较，P < 0.05，*P < 0.01;与青年对照组比较，P < 0.05，P < 0.01 | ||||||
动物实验研究结果显示，脑和海马内单胺类神经递质的水平与记忆障碍大鼠的学习记忆密切相关[10-12]，而NE在保持记忆方面有重要的作用，NE活性降低则能引起与年龄相关的记忆力减退，而改善记忆与促进DA的释放有关[13]，5-HT则参与调节动机、食欲、情绪等。王滨等[14]研究发现围绝经期自然衰老大鼠NE含量明显降低，5-HT、5-HIAA含量明显升高。本实验结果显示和颜坤泰胶囊中、低剂量组可不同程度的提高初老大鼠NE、β-EP含量，降低5-HT、5-HIAA、ACTH含量，推测和颜坤泰胶囊可有效的调整中枢类神经递质的合成，对神经内分泌紊乱具有一定的改善作用。
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