随着人们生活水平的提高和饮食结构的改变, 高尿酸血症的发病率逐年上升。近年来研究表明，高尿酸血症可导致痛风、尿酸性肾病与肾功能不全、高血压、肥胖，且与脂代谢紊乱、糖尿病及心脑血管疾病关系密切^[1-5]。近年来，痛风和高尿酸血症的发病率逐年上升，且发病年龄还有年轻化的趋势，给社会和家庭带来巨大的负担，是当今世界尤其是中老年男性的高发病之一^[6-7]。目前临床上高尿酸血症的治疗大多使用碱性药物、秋水仙碱、非甾体抗炎药、糖皮质激素、促尿酸排泄药物、抑制尿酸合成药物等治疗高尿酸血症，其中尤以别嘌呤醇最为常用^[8-10]，但别嘌呤醇所致的如皮肤过敏、发热、药物性肝肾损害、骨髓抑制、威胁生命的超敏变态反应综合征等毒副作用限制了其在临床上的安全使用^[11-16]。

近年来，中医药在临床治疗高尿酸血症方面，和在基础实验研究方面也取得一定的成果和进展，已成为治疗高尿酸血症药学研究的一个热点^[17-22]。临床上以苍术、黄柏为主药组成的二妙系列方剂治疗高尿酸血症取得了显著的效果^[23-27]。本实验研究以二妙丸中苍术、黄柏不同配伍比例来探讨黄柏与苍术提取物对高尿酸血症大鼠尿酸的影响。

1 实验材料与方法 1.1 实验动物

雄性SD大鼠，体质量（180±20）g，100只。由北京华阜康公司提供，动物饲养于中国医学科学院放射医学研究所，自由饮食、饮水，明暗交替光照12/12 h，温度22~24 ℃，湿度40%~60%。

1.2 药品与试剂 1.2.1 中药饮片

苍术（炒）、黄柏（生）中药饮片购于广州至信药业有限公司，产地为四川，批号20150701。

1.2.2 造模药

别嘌呤醇（美国Sigma-aldrich公司，每瓶5 g。批号081M1112V），酵母膏（北京索莱宝生物科技有限公司，每瓶500 g，批号20160601），腺嘌呤（美国Sigma-aldrich公司，每瓶25 g，批号BCBK3010V），氧嗪酸钾（美国Sigma-aldrich公司，每瓶100 g，批号STBD5759V）。

1.2.3 实验试剂

尿酸试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号20160523），尿素氮试剂盒、肌酐试剂盒、甘油三酯测定试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号160551），谷丙转氨酶测试盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号160701），谷草转氨酶测试盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号160651），胆固醇测定试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号161441），高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号160581）。

1.3 主要仪器

全自动生化分析仪（荷兰威图公司, 型号Microlab300），电子天平（上海恒平科学仪器有限公司，型号JA1003），多功能酶标仪（PerkinElmer公司，型号Enpire），离心机（Thermo Scientific公司，型号Legend Micro 17），超声破碎仪（美国SONICS公司，型号Uibra Cell）。

1.4 黄柏与苍术提取物制备

黄柏与苍术饮片各500 g，分别置于10 000 mL烧瓶中，加10倍量的水回流2 h，滤过，第2次加8倍量的水回流1.5 h，滤过，合并2次滤液于蒸发皿中，蒸干，得出干膏，将干膏粉碎后装于密封袋中备用，苍术出膏率为48.5%，黄柏出膏率为14%。

1.5 实验分组及给药

雄性SD大鼠100只，按随机数字表法随机分为10组，即空白对照组、模型组、苍术:黄柏1:1组（简称苍黄1:1组）、苍黄2:1组、苍黄1:2组、苍黄1:3组、苍黄3:1组、苍黄1:0组、苍黄0:1组，阳性药组（别嘌呤醇15 mg/kg）。二妙丸各比例组分别灌胃给药，给药容积为10 mL/kg，给药剂量为生药4.8 g/kg。给药组和模型组灌胃给予等量生理盐水。每日给药1次，连续给药7 d。

1.6 大鼠高尿酸血症模型的建立

采用酵母膏加腺嘌呤加氧嗪酸钾盐法诱导大鼠产生高尿酸血症，每日在给药前4 h，除空白对照组灌胃给予等量生理盐水外，其余各组分别灌胃给予酵母膏15 g/kg+腺嘌呤100 mg/kg，灌胃给药容积15 mL/kg，最后1次给予氧嗪酸钾溶液（300 mg/kg），给药容积10 mL/kg造模^[28-31]。

1.7 实验取材

给药第6~7天，用代谢笼收集大鼠24 h尿液。最后1 d在灌胃氧嗪酸钾1 h后，股动脉取血液（取血前24 h禁食，不禁水），3 500 r/min离心取血清。于冰台上快速分取肝肾组织，称取肝肾质量后，分取其中一小块肝和一个肾分别置于10%中性福尔马林溶液中固定，再取一块肝和另一个肾组织液氮冷冻后置于-80 ℃条件下保存。

1.8 指标检测

检测血清尿酸（BUA）、肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）浓度、血清氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆固醇（T-CHO）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）水平，观察大鼠尿液中尿肌酐（UCr）、尿尿素氮（UUN）、24 h尿量（24 h UV）、24 h尿酸排泄量（24 h UUA），和肝肾质量及系数。严格按试剂盒说明书进行测定。

1.9 数据处理及统计

采用SPSS18.0分析，所有实验数据用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较进行单因素方差分析, 组间两两比较时，若方差齐采用LSD法，若方差不齐采用Dunnett’s T₃法。

2 实验结果 2.1 对大鼠BUA、24 h UV、24 h UUA、XOD水平的影响

与空白对照组比较, 模型组BUA、24 h UV、24 h UUV、XOD水平显著升高（P＜0.01）。与模型组比较, 二妙丸不同比例组、阳性药组均显著降低BUA、24 h UV（除苍黄0:1组、阳性药组）、24 h UUA、XOD（除苍黄3:1、1:0、0:1组）水平（P＜0.05或P＜0.01）。结果见表 1。

2.2 对大鼠SCr、UCr、BUN、UUN水平的影响

与空白对照组比较, 模型组SCr、BUN水平显著升高（P＜0.01），而UCr、UUN水平显著降低（P＜0.05）。与模型组比较, 各比例组、阳性药组均显著降低SCr、BUN水平（P＜0.05或P＜0.01），升高UCr（除苍黄1:0组）、UUN（除苍黄3:1组）水平（P＜0.05或P＜0.01）。结果见表 2。

2.3 对大鼠ALT、AST、T-CHO、TG、HDL-C、LDL-C水平的影响

与空白对照组比较，模型组对ALT、AST水平均有降低趋势，但无显著影响（P＜0.05)，与模型组比较，各比例组均有升高ALT（除苍黄1:2组）、AST水平的作用，但无显著影响（P＞0.05）。与空白对照组比较，模型组均能显著增加T-CHO、TG、HDL-C、LDL-C水平（P＜0.05或P＜0.01）。与模型组比较，除阳性药组未能显著降低TG水平外（P＞0.05），其余各组均能显著降低T-CHO、TG、HDL、LDL-C水平（P＜0.05或P＜0.01）。结果见表 3。

2.4 对大鼠肝肾质量、肝肾脏器系数的影响

与空白对照组比较, 模型组均能显著增加肝肾质量、肝肾脏器系数水平（P＜0.01）。与模型组比较，除阳性药组未能显著降低肝脏质量、肝脏脏器系数水平（P＜0.05) 外，其余各组均能显著降低肝肾质量、肝肾脏器系数水平（P＜0.05或P＞0.01）。结果见表 4。

3 讨论

高尿酸血症是痛风发病的病理学基础，属于痛风病的无症状期，是痛风发生的前期状态，痛风必伴有高尿酸血症。大量的流行病学及临床研究表明，高尿酸血症及痛风与肥胖、高血压、高脂血症、糖尿病、肾病、冠心病、胰岛素抵抗的发生密切相关，已成为识别代谢综合征的早期标志^[32-33]。

本实验研究从药理实验动物造模角度来判断血清尿酸水平的改变，在采用酵母膏15 g/kg+腺嘌呤100 mg/kg+氧嗪酸钾300 mg/kg灌胃造模后，与空白对照组比较大鼠的BUA水平显著升高，说明模型建立成功。本实验结果表明，二妙丸各比例治疗组及阳性药组大鼠的BUA水平均显著低于模型组，与空白对照组比较，模型组大鼠SCr、BUN水平显著升高，UCr、UUN水平显著降低，24 h UV、24 h UUA水平显著升高，肾脏质量、肾脏脏器系数显著升高，表明高尿酸血症大鼠肾脏排泄减少及肾功能下降。与模型组比较，二妙丸各比例组及阳性药组均能显著降低高尿酸血症大鼠SUA、SCr、24 h UV（除苍黄0:1组、阳性药组）、24 h UUA、肾脏质量、肾脏脏器系数水平，升高UCr（除苍黄1:0组）、UUN（除苍黄3:1组）水平, 说明二妙丸具有促进高尿酸血症大鼠肾脏排泄和改善肾功能的作用。与空白对照组比较，模型组大鼠ALT、AST水平低于空白对照组但并无显著性差异，而肝脏质量、肝脏脏器系数水平显著高于空白对照组，与模型组比较，各比例组及阳性药组均能提高大鼠ALT（除苍黄1:2组）、AST水平但并无显著性差异，降低肝脏质量、肝脏脏器系数相关水平（除阳性药组），这是否与造模剂对肝脏有损害相关，具体有待进一步研究。与空白对照组比较，模型组大鼠XOD、T-CHO、TG、HDL-C、LDL-C水平均显著升高，与模型组比较，除阳性药组未能显著降低TG水平和苍黄3:1、1:0、0:1组未能降低XOD水平外，其余各组均能显著降低T-CHO、TG、HDL-C、LDL-C、XOD水平，说明二妙丸具有降低XOD的活性，抑制尿酸的生成并调节血脂水平的作用。

综上所述，二妙丸可以降低高血尿酸血症大鼠的尿酸水平，降低黄嘌呤氧化酶活性抑制尿酸的生成并促进肾脏尿酸排泄、改善肾功能、调节血脂水平的作用。其中苍黄1:2组效果较为显著，具体机制还需进一步研究。这可能是由于黄柏味苦性寒，入肾经，具有清热燥湿泻火解毒等作用，现代研究已表明黄柏具有抗氧化、保护肾脏、抗炎、调节细胞免疫等与治疗高尿酸血症、痛风有关的药理作用，对肾脏具有相对直接的保护作用^[34]。黄柏主要成分是小檗碱、掌叶防己碱、黄柏碱、药根碱、黄柏酮、蝙蝠葛任碱、白栝楼碱、木兰碱、柠檬苦素、巴马汀等。一方面，这些季胺碱类生物碱可以通过增加肾脏对尿酸盐的排泄和抑制肾脏对尿酸盐的重吸收而降低血尿酸水平，保护肾脏。另一方面，通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性抑制尿酸的产生。因此黄柏比例较高的类方疗效较好，由于中药黄柏成分复杂, 其具体有效成分及作用机制尚待进一步研究。然而苍黄1:3组并没有苍黄1:2组降尿酸明显，这可能和苍术的含量有关。苍术富含挥发油，是降尿酸的常用药，在中成药及复方中出现频率较高，挥发油具有抗炎作用和苍术酮强烈地抑制Na+，K+-ATP酶活性的利尿作用可能有密切的关系^[35]，但其降尿酸的机制，黄柏与苍术不同比例配伍作用及其机制仍需要进一步探索。