玉女煎出自明代著名医家张景岳所创《景岳全书》，由生石膏、熟地黄、麦门冬、知母、牛膝5味药组成。至今在医院临床中仍被广泛应用，具有清胃泻火，滋阴增液之功^[1]，多用于治疗糖尿病、牙周炎、口腔溃疡等属肾阴虚、胃火盛的病症^[2]。作为清脏腑热的代表方^[3]，在其现代药理研究中，君药知母、使药牛膝及臣药熟地黄分别具有改善2型糖尿病症状、抗炎、解热；可抑制药物引起的血糖升高、降血脂、免疫调节；降血糖、增强免疫力、强心等作用^[4-7]。作为复方中的主药，其化学成分复杂，方中药材产地分散，其代替品丰富，再加上生长环境、炮制加工方法不同等因素，导致其成分含量有一定的差异^[8]，在玉女煎成分含量测定相关文献中，有关测定知母中菝葜皂苷元及牛膝中齐墩果酸含量的报道^[9]，也有以熟地黄中毛蕊花糖苷为指标的报道^[10]。但是选用某一种或几种指标成分进行评价，并不能科学地进行中药的质量评价和控制^[11]。为了更好地控制其质量，保证药效，本文选择2015年版《中国药典》中知母、牛膝和熟地黄的质量控制指标芒果苷、β-蜕皮甾酮及毛蕊花糖苷作为其含量测定的指标成分^[12]，这些成分的测定对于其药理作用、临床疗效、质量控制更有重要意义，利用高效液相色谱梯度洗脱的方法，同时测定芒果苷、β-蜕皮甾酮和毛蕊花糖苷3种成分的含量，为多指标控制玉女煎的质量提供一种全面、简便的方法。

1 仪器与试剂

岛津LC-20AT色谱仪；超声清洗剂（昆山禾创超声仪器有限公司；220W、50Hz）；TG16-WS台式高速离心机（上海泸西分析仪器厂有限公司）；ALC-1104电子天平（瑞士Mettler Toledo公司；万分之一）；XP205电子天平（瑞士Mettler Toledo公司；十万分之一）。

对照品芒果苷、β-蜕皮甾酮和毛蕊花糖苷均由中国食品药品鉴定研究院提供；甲醇、乙腈均为色谱纯（天津市康科德科技有限公司），磷酸为分析纯（天津博迪化工股份有限公司）；超纯水为Milli-Q处理水。10批药材评情见表 1。

2 方法与结果 2.1 色谱条件

色谱柱：Ultimate XB-C₁₈（4.6 mm×250 mm，5 μm）；检测波长：250 nm，330 nm；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液；流速：1.0 mL/min；进样体积20 μL；柱温35 ℃。梯度洗脱程序见表 2。

2.2 溶液的制备 2.2.1 混合对照品溶液

精密称取芒果苷、β-蜕皮甾酮和毛蕊花糖苷对照品适量，加入50%甲醇溶液配制成质量浓度分别为0.50、0.12、0.10 mg/mL的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液

精密称取石膏60 g，熟地黄60 g，麦门冬24 g，知母18 g，牛膝18 g，并按照医院制剂的煎煮方法将其煎煮成药液，取适量药液，10 000 r/min离心10 min，取上清液，过0.45 μm的微孔滤膜，即得。

2.2.3 阴性样品

分别取不含熟地黄、不含知母及不含牛膝的阴性处方，按“2.2.2”项下方法制备对应的阴性样品。

2.3 方法学考察 2.3.1 专属性考察

取混合对照品、供试品、阴性样品等的溶液分别注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，结果表明处方中其他药物对所测成分无干扰。见图 1-4。

2.3.2 线性关系

精密吸取“2.2.1”项下的对照品溶液适量，配制成芒果苷浓度10、25、50、100、200、400 μg/mL，β-蜕皮甾酮浓度2.4、6、12、24、48、96 μg/mL，毛蕊花糖苷浓度2、5、10、20、40、80 μg/mL的混合对照品溶液，精密吸取20 μL注入液相色谱仪中，分别以芒果苷、β-蜕皮甾酮和毛蕊花糖苷的峰面积为纵坐标，其对应浓度为横坐标分别进行回归分析，得回归方程、相关系数及线性范围，见表 3。

2.3.3 精密度实验

用批1药材按“2.2.2”项下方法平行制备供试品溶液6份，按照2.1项色谱条件下进样，测定指标成分的峰面积。所得芒果苷、β-蜕皮甾酮和毛蕊花糖苷峰面积的RSD分别为0.18%、0.79%和1.90%，表明该方法精密度良好。

2.3.4 重复性实验

取批1药材按“2.2.2”项下方法制备样品，按照“2.1”项色谱条件，连续进样6次，测得芒果苷、β-蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷峰面积RSD依次为1.97%、1.01%、0.99%，表明重复性良好。

2.3.5 稳定性实验

取批1药材按“2.2.2”项下方法制备样品分别于制备后0、2、4、8、12、24 h，按照“2.1”项色谱条件进样，测得供试品中指标成分峰面积，所得芒果苷、β-蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷峰面积的RSD分别为1.22%、0.54%和1.30%。表明供试品在24 h内稳定性良好。

2.3.6 回收率实验

取已知含量的药液9份，按高、中、低3个浓度分别精密加入芒果苷、β-蜕皮甾酮和毛蕊花糖苷的混合对照品适量，每一浓度平行3份，按“2.2.2”项下方法制备供试品，按照“2.1”项色谱条件进样测定，计算回收率，所得芒果苷、β-蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷的平均回收率分别为100.2%、101.0%、98.18%，RSD分别为2.73%、1.95%、1.39%。见表 4。

2.3.7 样品测定

取不同产地的药材10批（见表 1），按“2.2.2”项下方法制备供试品，测定不同批次汤剂中芒果苷、β-蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷的含量，结果见表 5。

3 讨论

玉女煎在临床上多用于治疗糖尿病、牙周炎、口腔溃疡。根据其临床应用，选择方中的君药、臣药与使药的有效成分芒果苷、毛蕊花糖苷、β-蜕皮甾酮作为含量测定的指标成分，在药效方面更好的控制了汤剂的质量。这些成分的测定对于其药理作用、临床疗效、质量控制更有重要意义。

现代研究表明，玉女煎加减方能显著降低高血糖模型大鼠的血糖、血脂等指标^[13]，这与方中组成药材密切相关。知母作为处方中的君药，单独使用具有清热泻火、除烦止渴、润肠滑燥等功效，作为知母中双苯吡酮类的主要成分，芒果苷具有抗炎、抗病毒、降血糖及改善2型糖尿病症状的作用；与石膏结合配伍使用，具有清肺胃实热的功效，增强清热泻火、除烦^[14-16]。熟地黄作为臣药，是玄参科植物地黄的块根经酒炖法加工炮制而成的，主要含有糖类、氨基酸、梓醇、毛蕊花糖苷等化学成分，研究表明其具有抗氧化、抗衰老、增强免疫力等作用^[17]，同时能防止糖尿病并发症的发生和发展^[18]。作为使药，牛膝为苋科植物牛膝的干燥根，其中富含糖类、植物甾酮类、皂苷类及黄酮类等多种成分^[19]。现代药理学研究表明，可通过对细胞凋亡的抑制，来保护糖尿病大鼠的肾脏，从而起到降血糖的作用。除此之外，还具有降血压、降血脂、抗炎等药理作用^[20-21]。

由于3种成分的极性相差较大，同时测定时需梯度洗脱才能有效分离，在实验中先后比较了乙腈-0.1%冰醋酸水溶液、乙腈-0.1%甲酸水溶液、乙腈-0.1%磷酸水溶液以及乙腈-纯水构成的洗脱系统。结果表明，乙腈-0.1%磷酸水系统色谱峰峰型分离度好对称。

258、250、330 nm分别是2015年版《中国药典》中规定的知母检测成分芒果苷、牛膝检测成分β-蜕皮甾酮和熟地黄检测成分毛蕊花糖苷最大吸收波长。结合玉女煎的指标成分芒果苷、β-蜕皮甾酮和毛蕊花糖苷的全波长扫描3D图，β-蜕皮甾酮在250 nm左右吸收值最大，在330 nm处几乎无吸收，采用单一波长，会导致一种成分吸收过小，影响测定的准确性，因此，本实验采用250 nm作为芒果苷与β-蜕皮甾酮的检测波长，330 nm作为毛蕊花糖苷的检测波长，进行含量测定。

由实验结果可知，不同批次汤剂间芒果苷、β-蜕皮甾酮和毛蕊花糖苷有明显的差异，这充分的说明了本研究的重要性。即同时测定这3种对玉女煎药理作用、临床疗效、质量控制有重要影响的指标成分的含量，为其建立相应的质量标准，可以更好地保证玉女煎在临床中的药效。

用本法同时测定玉女煎中芒果苷、蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷的含量，具有简便、快捷、专一性强、重现性好、所需试剂简单易得等特点，为其汤剂质量控制提供可靠的方法。