2017, Vol. 36文章信息
- 倪晶宇倪晶宇, 王卫明王卫明, 李澜李澜, 樊官伟樊官伟
- NI Jing-yu, WANG Wei-ming, LI Lan, FAN Guan-wei
- 参竹精片对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用
- The effects of protection of Shenzhujing tablet treatment on MIRI
- 天津中医药大学学报, 2017, 36(4): 278-281
- Journal of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, 2017, 36(4): 278-281
- http://dx.doi.org/10.11656/j.issn.1673-9043.2017.04.11
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文章历史
收稿日期: 2017-03-15
2. 方剂学教育部重点实验室, 天津 300193;
3. 天津市中药药理学重点实验室, 天津 300193;
4. 天津中医药大学第一附属医院, 天津 300193
2. Ministry of Education Key Laboratory of Formula of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China;
3. Tianjin Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Pharmacology, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China;
4. The First Affiliated Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300381, China
参竹精片由手掌参、黄精、玉竹、何首乌（制）、广枣5味药材组成，具有补肾、滋补强身功能，用于治疗肾寒、肾虚、精血不足、筋骨酸痛、年迈体弱等症。据现代药理研究发现，黄精、玉竹、何首乌、广枣均有抗动脉粥样硬化和保护心血管的作用，而其中手掌参具有明显的抗氧化作用[1-7]。本实验拟观察参竹精片对小鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用，旨在为临床应用提供实验依据。
1 材料 1.1 实验动物选择健康雄性SD大鼠，体质量（230±10）g，由北京市维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号为11400500001111。
1.2 实验药物参竹精片（内蒙古元和药业股份有限公司，批号：20140922），盐酸维拉帕米片（天津市中央药业有限公司，批号：140404）。
1.3 实验试剂水合氯醛（索莱宝化学试剂公司），肝素（江苏万邦生化医药股份有限公司），超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：20150703）；丙二醛（MDA）检测试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：20150706），肌酸激酶（CK）检测试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号：150631）。
1.4 实验仪器解剖显微镜（STEMI2000-C，德国蔡司），小动物超声（Vevo2100，加拿大VisualSonics公司）, 超声系统气体麻醉装置（VS4153，加拿大VisualSonics公司），MicroScan（MS-250，加拿大VisualSonics公司），倒置显微镜（OLYMPUS DP71，日本OLYMPUS公司），全自动生化分析仪（Microlab 300，荷兰威图公司）。
2 实验方法 2.1 分组及给药选SD雄性大鼠60只，利用随机数字表法将大鼠随机分为模型组、参竹精片0.36、0.18、0.09 g/kg剂量组和维拉帕米对照组和假手术组，每组10只，各给药组按照设定的剂量灌胃，每日1次，连续7 d，假手术组和模型组给予等量的蒸馏水。
2.2 心肌缺血再灌注损伤模型建立方法给药7 d后，于术前12 h禁食不禁水，以6 mL/kg腹腔注射5%水合氯醛，麻醉。手术打开胸腔，结扎冠状动脉左前降支缺血30 min、结扎后肉眼可见心脏表面相应区域由鲜红色迅速变成苍白色，血管供应范围心肌逐渐出现紫绀；松开结扎线再灌注后，心肌紫绀渐渐消失或减轻，变白心肌不同程度恢复红色。再灌注120 min，假手术组仅分离冠状动脉左前降支，不结扎，其余处理同上。
2.3 心功能指标检查再灌注120 min后，采用小动物超声仪测定大鼠心功能：左室射血分数（LVEF）、左心室短轴缩短率（LVFS）、左心室收缩末期容积（LV Vols）、左心室收缩末期内直径（LVIDs）、左心室舒张末期容积（LV Vold）、左心室舒张末期内直径（LVI Dd）等参数，并用超声系统自带软件进行分析。
2.4 血样和心脏样本采集再灌注120 min后，腹主动脉取血，3 000 r/min，离心10 min，分离血清，-80 ℃保存备用。取心脏，称质量，计算心脏指数（心脏指数=心脏质量/体质量×100%）。
2.5 统计学方法应用SPSS 18.0软件进行数据统计分析，数据以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较进行单因素方差分析，组间两两比较时，若方差齐采用LSD法，若方差不齐采用Dunnett’s T3法，以P＜0.05为差异有统计学意义。
3 结果 3.1 参竹精片对心肌缺血/再灌注损伤大鼠心脏收缩功能的影响模型组较假手术组流出道速率、流出道峰压显著降低（P < 0.01），参竹精片0.36 g/kg、0.18 g/kg剂量组及维拉帕米片组对流出道速率、流出道峰压有升高的趋势；模型组较假手术组LVEF明显降低（P < 0.01），参竹精片0.18 g/kg剂量组和维拉帕米片组LVEF升高（P < 0.05）；模型组较假手术组LVFS明显降低（P < 0.01），参竹精片0.18 g/kg剂量组和维拉帕米片组与模型组相比LVFS升高（P < 0.01）；模型组较假手术组LV Vols显著增加（P < 0.01），参竹精片各剂量组及维拉帕米片组能够降低LV Vols（P < 0.01）；模型组较假手术组LVIDs显著增加（P < 0.01），参竹精片0.18g/kg剂量组显著降低LVIDs（P < 0.01）。见表 1。
| 组别 | 剂量 | n | 流出道速率 | 流出道峰压 | LVEF | LVFS | LV Vols | LVIDs |
| 假手术组 | - | 10 | 1 326±174 | 6.92±2.17 | 86.87±8.45 | 63.93±9.60 | 28.59±12.29 | 2.13±0.71 |
| 模型组 | - | 10 | 816±115** | 2.70±0.77* | 46.20±13.97** | 26.84±9.27** | 118.24±47.26** | 4.89±0.91** |
| 参竹精片高剂量组 | 0.36 g/kg | 10 | 1 064±184 | 5.11±1.95 | 64.25±12.55 | 39.86±8.99 | 63.07±13.80## | 3.38±0.73 |
| 参竹精片中剂量组 | 0.18 g/kg | 10 | 1 001±156 | 4.36±1.20 | 71.76±15.82# | 48.90±7.60## | 30.63±10.17## | 2.62±0.47## |
| 参竹精片低剂量组 | 0.09 g/kg | 10 | 849±113 | 3.18±1.13 | 63.67±10.03 | 35.12±7.10 | 64.79±16.92## | 3.84±0.77 |
| 维拉帕米片组 | 10.00 mg/kg | 10 | 1 086±232 | 5.99±2.04 | 71.35±10.07# | 43.47±8.63## | 78.01±13.82## | 3.56±0.83 |
| 注：与假手术组比较*P < 0.05，**P < 0.01；与模型组比较#P < 0.05，##P < 0.01。 | ||||||||
模型组较假手术组LVIDd显著增加（P < 0.05），参竹精片0.36 g/kg、0.18 g/kg剂量组显著降低LVIDd（P < 0.05）；模型组较假手术组LV Vold显著增加（P < 0.01），参竹精片各剂量组能够显著降低LV Vold（P < 0.01）。见表 2。
| 组别 | 剂量 | n | LVIDd | LV Vold |
| 假手术组 | - | 10 | 5.33±0.37 | 137.75±22.07 |
| 模型组 | - | 10 | 6.50±0.65* | 214.81±54.15** |
| 参竹精片高剂量组 | 0.36 g/kg | 10 | 5.33±0.28# | 147.27±27.71## |
| 参竹精片中剂量组 | 0.18 g/kg | 10 | 5.23±0.49# | 129.91±26.11## |
| 参竹精片低剂量组 | 0.09 g/kg | 10 | 5.90±0.79 | 137.04±27.23## |
| 维拉帕米片组 | 10.00 mg/kg | 10 | 6.05±0.66 | 186.82±48.38 |
| 注：与假手术组比较，*P < 0.05，**P < 0.01；与模型组比较，#P < 0.05，##P < 0.01。 | ||||
模型组较假手术组心脏指数显著升高（P < 0.01），参竹精片0.36、0.18 g/kg剂量组与模型组相比显著降低（P < 0.01）；模型组与假手术组相比室间隔舒张期厚度升高（P < 0.05），参竹精片各剂量组及维拉帕米片组显著降低（P < 0.01）。见表 3。
| 组别 | 剂量 | n | 心脏指数 | 室间隔舒张期厚度 |
| 假手术组 | - | 10 | 0.349±0.010 | 1.66±0.31 |
| 模型组 | - | 10 | 0.397±0.016** | 1.96±0.42* |
| 参竹精片高剂量组 | 0.36 g/kg | 10 | 0.347±0.018## | 1.53±0.15## |
| 参竹精片中剂量组 | 0.18 g/kg | 10 | 0.346±0.014## | 1.49±0.23## |
| 参竹精片低剂量组 | 0.09 g/kg | 10 | 0.357±0.029 | 1.61±0.06## |
| 维拉帕米片组 | 10.00 mg/kg | 10 | 0.339±0.029## | 1.59±0.08## |
| 注：与假手术组比较，*P < 0.05，**P < 0.01；与模型组比较，##P < 0.01。 | ||||
模型组较假手术组血清中CK含量显著升高（P < 0.01），参竹精片0.18 g/kg剂量组和维拉帕米组与模型组相比显著降低（P < 0.01）；模型组与假手术组相比血清LDH含量显著升高（P < 0.01），参竹精片0.36 g/kg剂量组明显降低（P < 0.05）。见表 4。
| 组别 | 剂量 | n | CK（U/mL） | LDH（U/L） |
| 假手术组 | - | 10 | 1759.00±409.14 | 1444.67±386.91 |
| 模型组 | - | 10 | 3902.00±1311.80** | 2662.75±438.00** |
| 参竹精片高剂量组 | 0.36 g/kg | 10 | 3210.83±1366.57 | 1760.92±743.60# |
| 参竹精片中剂量组 | 0.18 g/kg | 10 | 2749.45±759.94## | 1961.82±761.40 |
| 参竹精片低剂量组 | 0.09 g/kg | 10 | 2989.75±598.00# | 1971.42±590.13 |
| 维拉帕米片组 | 10.00 mg/kg | 10 | 2665.71±564.42## | 1755.43±378.59## |
| 注：与假手术组比较，**P < 0.01；与模型组比较，#P < 0.05，##P < 0.01。 | ||||
模型组较假手术组血清中MDA含量显著升高（P < 0.01），参竹精片0.18g/kg剂量组MDA降低（P < 0.05），参竹精片0.09 g/kg剂量组MDA降低更明显（P < 0.01）；模型组较假手术组血清中SOD含量明显降低（P < 0.01），参竹精片各剂量组都具有升高SOD的作用（P < 0.01）。见表 5。
| 组别 | 剂量 | n | MDA | SOD |
| 假手术组 | - | 10 | 4.09±1.24 | 82.70±3.88 |
| 模型组 | - | 10 | 10.34±2.68** | 45.39±12.13** |
| 参竹精片高剂量组 | 0.36 g/kg | 10 | 6.13±2.37 | 68.18±4.56## |
| 参竹精片中剂量组 | 0.18 g/kg | 10 | 6.39±1.32# | 67.82±5.84## |
| 参竹精片低剂量组 | 0.09 g/kg | 10 | 4.53±1.44## | 72.19±2.74## |
| 维拉帕米片组 | 10.00 mg/kg | 10 | 7.99±2.92 | 45.09±6.55 |
| 注：与假手术组比较，**P < 0.01；与模型组比较，#P < 0.05，##P < 0.01。 | ||||
心肌缺血/再灌注损伤（MIRI）是一种临床上常见的病理现象，其常出现于心肌组织缺血发生一定时间后再次恢复血供时，不仅未能使心脏功能恢复正常，反而加重其功能障碍和结构损伤，甚至导致不可逆的损伤[8-9]。传统蒙药参竹精片具有补肾、滋补强身功能，用于治疗肾寒、肾虚、精血不足、筋骨酸痛、年迈体弱等症。据现代药理研究发现黄精、玉竹、何首乌、广枣均有抗动脉粥样硬化和保护心血管的作用，而其中手掌参具有明显的抗氧化作用。本实验结果表明参竹精片也具有保护心血管和抗氧化的作用。
MIRI发生后常常会诱发左心室舒缩功能失调[10-11]。本实验超声数据显示模型组较假手术组左室室壁运动减弱、收缩舒张功能下降，如流出道速率、流出道峰压、LVEF、LVFS显著降低（P < 0.01）；LV Vols、LVIDs显著升高，参竹精片0.36、0.18 g/kg剂量组对流出道速率、流出道峰压有升高的趋势；对LVEF（P < 0.05）、LVFS（P < 0.01）明显升高；对LV Vols、LVIDs显著降低（P < 0.01），提示参竹精片可改善MIRI后的心脏舒缩功能。
MIRI后心肌细胞会发生能量供给障碍，细胞膜通透性增高，膜泵功能失调，细胞内LDH、CK等酶漏出，致使血清中相关酶的浓度升高。从血清中这些酶活性升高的程度，即可反映心肌损害的程度[12-13]。本次实验中模型组CK、LDH显著升高（P < 0.01），参竹精片0.18、0.09 g/kg剂量组能够降低血清CK值（P < 0.01），参竹精片仅0.36 g/kg剂量组降低LDH（P < 0.05）。提示参竹精片可减轻MIRI后的心肌损伤。
缺血再灌注损伤使得代谢产物聚积，大量氧自由基产生，引起心肌细胞的脂质化，影响细胞膜的流动性，血清MDA水平升高，SOD氧自由基清除能力下降[14-18]。本实验结果显示参竹精片对MIRI大鼠的MDA有降低作用，SOD有升高作用，表明参竹精片具有抗氧化作用，可减轻缺血再灌注产生的自由基对心肌的损伤作用。
实验结果表明，参竹精片对大鼠MIRI具有保护作用，可为指导临床用于治疗或辅助治疗心血管疾病提供实验依据。
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