血脂宁收载于2015版《中华人民共和国药典》一部中，由决明子、制何首乌、荷叶、山楂4味中药组成，具有活血行气、化瘀降脂的功效，临床上常用于治疗高脂血症^[1-2]。研究表明，血脂宁中的主要降脂成分为二苯乙烯苷类、生物碱类、黄酮类和蒽醌类等^[3-6]。其中药材决明子中的红镰霉素-6-O-β-D-龙胆二糖苷[红镰霉素（HLMS）]、制何首乌中的二苯乙烯苷（FHSG）、荷叶中的荷叶碱（HYJ）和金丝桃苷（JSTG）均具有一定的降血脂、保肝活性^[7-10]，且此4种成分具有不同化学结构（见图 1），分别为萘骈吡喃酮类、二苯乙烯类、生物碱类和黄酮类化合物，容易发生降解^[11-14]。因此，本实验利用恒温加速法，以化学动力学为理论基础^[15]，通过分别测定复方血脂宁中4种活性成分单体HLMS、THSG、HYJ、JSTG在不同pH（分别模拟胃液、小肠液和大肠液）、温度条件下含量随时间的变化，研究4种活性成分单体在不同pH、温度压力条件下的降解规律，以期为复方血脂宁的体内稳定性研究及其相关制剂的制备、使用和保存条件提供实验依据。

1 材料

高效液相色谱仪（Shimadzu LC-20A，日本岛津）；十万分之一天平（Sartorius BT125D，赛多利斯科学仪器有限公司）；电子天平（JA31002，上海精天电子仪器有限公司）；高速离心机（TG16-WS，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；pH计（DELTA 320，瑞士Mettler Toledo公司）；超声波清洗器（KH3200B，昆山禾创超声仪器有限公司）。

红镰霉素-6-O-β-D-龙胆二糖苷（简称红镰霉素，纯度≥98%，南京拓海生物科技有限公司）；2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（THSG，中国食品药品检定研究院，批号110844-200606）；（HYJ，中国药品生物制剂检定所，批号111566-200703）；（JSTG，中国药品生物制剂检定所，批号111521-201004）。乙腈、甲醇、甲酸（美国Sigma公司，色谱纯）；磷酸（天津市福晨化学试剂厂，分析纯）；磷酸钠（天津市化学试剂批发公司，分析纯）；氢氧化钠（天津市化学试剂批发公司，分析纯）；冰醋酸（天津市康科德技术有限公司，色谱纯）；三乙胺（天津市元立化工有限公司，分析纯）。

2 方法与结果 2.1 含量测定 2.1.1 色谱条件

Waters Symmetry ShieldTM RP₁₈色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；HLMS、THSG、HYJ、JSTG的流动相分别为：乙腈-0.1%磷酸水（25:75）、乙腈－水（25:75）、乙腈－水－三乙胺－冰醋酸（27:70.6:1.6:0.78）、乙腈－0.1%磷酸水（35:75）；检测波长分别为278、320、270、360 nm；流速1 mL/min；进样量10 μL；柱温25 ℃。

2.1.2 线性关系的考察

精密称取HLMS对照品、THSG对照品、荷叶碱对照品、金丝桃苷对照品2、10、3、10 mg，分别置于10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别得到0.2 mg/mL HLMS储备液，1 mg/mL THSG储备液，0.3 mg/mL HYJ储备液，1 mg/mL JSTG储备液。分别吸取各对照品溶液适量于棕色容量瓶中，用近中性水逐级稀释成一系列不同浓度的对照品溶液，摇匀，分别进样10 μL测定峰面积。以对照品质量浓度（mg/mL）为横坐标、对峰面积（A）为纵坐标进行线性回归分析，得HLMS、THSG、HYJ、JSTG的线性回归方程分别为=6×10⁷X+7 210.3，r=0.999 5；=4×10⁷X-28 860，r=0.999 9；=4×10⁷X+241 990，r=0.999 8；=4×10⁷X+123 480，r=0.999 9。结果表明HLMS、THSG、HYJ、JSTG分别在0.002~0.04、0.005~0.1、0.003~0.06、0.005~0.1 mg/mL线性关系良好。

2.1.3 精密度考察

分别吸取“2.1.2”项下各对照品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件分别进样6针测定峰面积，计算精密度。HLMS、THSG、HYJ、JSTG 4种成分的RSD分别为1.82%、1.77%、1.37%、1.76%，RSD值均小于2.00%，表明仪器精密度良好。

2.2 pH稳定性实验 2.2.1 模拟体液和样品溶液的配制

模拟胃液（pH1.2盐酸溶液）：9 mL浓盐酸用蒸馏水稀释至1 000 mL得pH1.2盐酸溶液；模拟小肠液（pH6.8缓冲溶液）：取0.2 mol/L磷酸二氢钾溶液250 mL，加0.2 mol/L氢氧化钠溶液118 mL，用水稀释至1 000 mL即得；模拟大肠液(pH8.3缓冲溶液)：以pH6.8缓冲溶液为基础，加氢氧化钠溶液调制pH为8.3即得。

样品溶液的配制：分别量取一定量的对照品储备液适量于10 mL棕色容量瓶中，用提前配制好的模拟体液（pH1.2、6.8、8.3）分别将其稀释至刻度，各3份。

2.2.2 pH稳定性实验

按“2.2.1”项下方法配制样品，室温放置，涡旋混匀，得到不同pH条件下的样品溶液，分别HPLC分析样品溶液中对照品的初始浓度（C₀）和不同时间的剩余浓度（C_t），结果根据动力学规律，按（伪）一级动力学对结果进行拟合，以百分剩余浓度的对数[ln（C_t/C₀）]对时间（t）作图，计算4种活性成分单体在3个模拟体液pH下的降解速率常数（k）、半衰期（t_1/2）等（公式1，2），各成分的降解参数见表 1。

(公式 1)

(公式 2)

2.2.3 HLMS

常温条件下，HLMS的含量随时间变化关系。根据图线性回归结果发现，不同pH条件下，HLMS单体水溶液降解模型符合一级动力学规律，且降解速率pH1.2＞pH8.3＞pH6.8。结合表 1中HLMS的降解参数表明，常温下，HLMS在酸性条件下较不稳定，中性和碱性条件下比较稳定，见图 2。

2.2.4 THSG

常温条件下，THSG的含量随时间变化关系。根据图线性回归结果发现，不同pH条件下，THSG单体水溶液降解模型符合一级动力学规律，且降解速率随碱性增加而加快。结合表 1中THSG的降解参数表明，常温下，THSG在碱性条件下不稳定，在中性和酸性条件下比较稳定，见图 3。

2.2.5 HYJ

常温条件下，HYJ的含量随时间变化关系，见图 4。根据图线性回归结果发现，不同pH条件下，HYJ单体水溶液降解模型均符合一级动力学规律，且降解速率随碱性增加而加快。结合表 1中HYJ的降解参数表明，常温下，在实验的100 h内，HYJ在酸性条件下比较稳定，未发生降解；在中性和碱性条件下不稳定，发生了少量降解。

2.2.6 JSTG

常温条件下，JSTG的含量随时间变化关系。根据图线性回归结果发现，不同pH条件下，JSTG单体水溶液降解模型均符合一级动力学规律，且降解速率pH8.3 > pH1.2 > pH6.8。结合表 1中JSTG的降解参数表明，常温下，在实验时间范围内，JSTG在中性条件下相对稳定，发生少量降解；在酸性条件下，其降解速率较中性条件下增加；在碱性条件下，JSTG降解速率达到最大，见图 5。

2.3 温度稳定性实验 2.3.1 样品溶液的配制

分别量取一定量的对照品储备液于10 mL棕色容量瓶中，用近中性水稀释至刻度，各配制3份。

2.3.2 温度稳定性实验

首先按“2.3.1”项下实验方法配制4种成分样品溶液并置于不同温度（60、70、80、90 ℃）环境下，得到不同温度条件下的样品溶液，分别HPLC分析样品溶液中对照品的初始浓度（C₀）和不同时间的剩余浓度（C_t），结果根据动力学规律，以百分剩余浓度的对数[ln（C_t/C₀）]对时间（t）作图，计算4种活性成分在不同温度下的降解速率常数k，并根据Arrhenius公式，以lnk对-1/T作图，计算各成分的降解活化能Ea（公式3）。计算得到的4种活性成分在不同温度下的降解参数见表 2。

(公式 3)

2.3.3 HLMS

在近中性水溶液中，HLMS的含量随时间变化关系，见图 6。根据图 6，线性回归结果发现，HLMS的降解反应呈现一级动力学规律，降解反应速率随温度的升高而加快。不同温度压力条件下，HLMS降解速率常数k及半衰期，以及根据Arrhenius公式，以lnk对-1/T作图（见图 7），计算的降解活化能如表 2所示。

2.3.4 THSG

在近中性水溶液中，THSG的含量随时间变化关系，见图 8。根据图，线性回归结果发现，THSG的降解反应呈现一级动力学规律，降解反应速率随温度的升高而加快。不同温度压力条件下，THSG降解速率常数k及半衰期，以及根据Arrhenius公式，以lnk对-1/T作图（见图 9），计算的降解活化能如表 2所示。

2.3.5 HYJ

在近中性水溶液中，HYJ的含量随时间变化关系，见图 10。根据图，线性回归结果发现，HYJ的降解反应呈现一级动力学规律，降解反应速率随温度的升高而加快。不同温度压力条件下，HYJ降解速率常数k及半衰期，以及根据Arrhenius公式，以lnk对-1/T作图（见图 11），计算的降解活化能如表 2所示。

2.3.6 JSTG

在近中性水溶液中，JSTG的含量随时间变化关系，见图 12。根据图，线性回归结果发现，JSTG的降解反应呈现一级动力学规律，降解反应速率随温度的升高而加快。不同温度压力条件下，JSTG降解速率常数k及半衰期，以及根据Arrhenius公式，以lnk对-1/T作图见图 13，计算的降解活化能如表 2所示。

3 小结

实验结果表明，复方血脂宁中4种活性成分单体HLMS、THSG、HYJ、JSTG在不同pH和温度条件下的降解反应均呈现一级动力学规律。通过对比4种成分单体在3种模拟体液环境中的降解参数可知，室温条件下，荷叶碱和红镰霉素在不同pH值缓冲液中降解较慢，而HLMS、THSG在弱碱性条件下降解速率较快。提示复方血脂宁的活性成分在人体消化环境中的降解速率各异，设计剂型时，应综合考虑各成分的降解特点，以期达到更好的药效。

在高温压力下，水溶液中的4种活性成分单体均发生不同程度的降解，且降解反应速率随温度的升高而加快。根据计算的降解活化能大小，可知4种活性成分单体发生降解的难易程度为HLMS < THSG < JSTG < HYJ。提示在复方血脂宁相关制剂的制备、储存、使用过程中应避免碱性条件和高温环境。本实验为复方血脂宁中活性成分在体内的稳定性、药代动力学和相关制剂研究提供了一定的实验依据，但4种活性成分的降解对复方血脂宁药效的影响还有待进一步研究。