2017, Vol. 36文章信息
- 王昊王昊, 夏明辉夏明辉, 庞旭庞旭, 韩立峰韩立峰, 张艳军张艳军
- WANG Hao, XIA Ming-hui, PANG Xu, HAN Li-feng, ZHANG Yan-jun
- 荷叶中苷类成分的分离鉴定
- Isolation and identification of glycosides from the leaves of Nelumbo nucifera Gaertn.
- 天津中医药大学学报, 2017, 36(5): 368-373
- Journal of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, 2017, 36(5): 368-373
- http://dx.doi.org/10.11656/j.issn.1673-9043.2017.05.13
-
文章历史
收稿日期: 2017-05-10
2. 沧州市中心医院, 沧州 061000;
3. 天津中医药大学中医药研究院, 天津 300193;
4. 天津中医药大学教务处, 天津 300193
2. Cangzhou central hospital, Cangzhou, Tianjin 061000, China;
3. Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China;
4. Office of Academic Affairs, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China
荷叶（Nelumbinis Folium）为睡莲科莲属植物莲（Nelumbo nucifera Gaertn.）的干燥叶，在中国大部分地区均有分布。2015版《中国药典》记载：“荷叶，味苦性平，归肝、脾、胃经，具有清暑化湿、升发清阳、凉血止血之功效，用于暑热烦渴、暑湿泄泻、脾虚泄泻、血热吐衄、便血崩漏等症。”[1]现代研究表明，荷叶主要含有黄酮、降倍半萜、生物碱、挥发油等化学成分，具有减肥降脂、降血压、祛痰止咳等广泛的药理作用[2-3]。本课题组对荷叶化学成分进行了系统研究[4-6]，从其70%乙醇提取物中分离得到9个苷类化合物，它们分别为：异槲皮苷（1）、槲皮素－3－O－β－D－吡喃木糖－（1→2）－β－D－吡喃半乳糖苷（2）、槲皮素－3－O－β－D－葡萄糖醛酸－6″－甲酯（3）、槲皮素－3－O－β－D－葡萄糖醛酸－6″－乙酯（4）、山奈酚－3－O－β－D－吡喃半乳糖苷（5）、鼠李素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖苷（6）、柯伊利素－7－O－β－D－吡喃葡萄糖苷（7）、（+）－松脂醇－4－O－β－D－吡喃葡萄糖苷（8）、（+）－表松脂醇－4′－O－β－D－吡喃葡萄糖苷（9），其中化合物3、4、8、9为首次从莲属植物中分离得到的化合物。
1 仪器与材料Agilent 1200系列高效液相色谱仪制备型：二元泵、7725i手动进样器、VWD检测器，美国Agilent公司；Waters 2695型高效液相色谱仪分析型：Waters 2695 Alliance Separation Module，Empower Pro工作站，Waters 2487双波长检测器，美国Waters公司。HPLC色谱柱[制备型：Cosmosil C18（250 mm × 20 mm，5 μm）]，日本Cosmosil公司；分析型：YMC-Pack ODS-A[（250 mm×4.6 mm，5 μm），日本YMC公司）]；Agilent 6520B型四级杆-飞行时间质谱仪，美国Agilent公司。Bruker Ascend 500 MHz超导核磁共振波谱仪，瑞士布鲁克公司。
可剪裁型硅胶GF254薄层层析板（天津思利达科技有限公司）；展开剂：氯仿-甲醇-水（系列比例、下层）；薄层显色剂：体积分数10%的硫酸乙醇溶液；正相硅胶（柱层析200~300目，青岛海洋化工厂）；反相ODS（YMC-ODS-A-50 μm，120 Å，日本YMC公司）；色谱纯甲醇、乙腈及分析纯乙醇、石油醚（60~90 ℃）、乙酸乙酯、正丁醇等（天津市康科德科技有限公司）；分析纯三氯甲烷、二氯甲烷（天津市江天化工技术有限公司）。
20 kg荷叶药材购自河北安国市药材市场，经天津中医药大学中药学院张丽娟教授鉴定为睡莲科植物莲（Nelumbo mucifera Gaertn.）的干燥叶，药材标本保存于本实验室。
2 提取与分离荷叶药材（20 kg）经10倍量的70%乙醇回流提取两次，每次2 h，过滤，合并滤液，减压回收溶剂，最后50 ℃下真空干燥，得浸膏约2 400 g。取约2 200 g干膏加入2 L去离子水混悬，依次用石油醚（60~90 ℃）、二氯甲烷、乙酸乙酯以及正丁醇萃取，分别得石油醚萃取物32 g、二氯甲烷萃取物137 g、乙酸乙酯萃取物77 g以及正丁醇萃取物364 g。对乙酸乙酯层进行硅胶柱层析分离，先用氯仿洗脱，再以氯仿-甲醇-水（13:3:1→10:3:1→8.5:3:1→7:3:1）进行梯度洗脱，最后用甲醇洗脱，薄层检识，合并相同流分，得到7个流分[Fr.E1（21.5 g）、Fr.E2（7.4 g）、Fr.E3（6.7 g）、Fr.E4（5.9 g）、Fr.E5（4.5 g）、Fr.E6（2.8 g）、Fr.E7（7.1 g）]。Fr.E5和Fr.E6直接用制备型高效液相色谱仪进行分离纯化，分别得到化合物1（22.3 mg）和2（32.5 mg）。取其中Fr.E2经ODS柱色谱，MeOH-H2O梯度洗脱（30:70→40:60→50:50→60:40），HPLC检识，合并相同流分，共得到13组流分（Fr.E2-1~Fr.E2-13）。其中Fr.E2-3（311.3 mg）经制备高效液相色谱制备，分别得到化合物8（11.8 mg）和9（4.6 mg）；Fr.E2-7（239.2 mg）经制备高效液相色谱分离纯化，分别得到化合物3（15.8 mg）和4（50.1 mg）；Fr.E2-8（584.2 mg）经制备高效液相色谱分离，得到化合物6（34.0 mg）。Fr.E3经ODS柱色谱，MeOH-H2O梯度洗脱（40:60→50:50→60:40→100:0），合并相同流分，得到17组流分（Fr.E3-1~Fr.E3-17），Fr.E3-8（64.3 mg）经制备高效液相色谱分离纯化，分别得到化合物5（7.3 mg）和7（10.3 mg）。化合物1~9结构见图 1。
|
| 图 1 化合物1~9的结构 |
化合物1：黄色粉末，TLC板上，紫外灯254 nm下有一明显暗斑，用体积分数为10%的硫酸乙醇溶液呈亮黄色，推测其可能为黄酮类化合物。高分辨Q-TOF-MS给出其准分子离子峰m/z 465.102 2[M+H]+，确定其分子式为C21H20O12（Calcd. 465.102 8）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）谱中，最低场区δ 12.64为一个单峰，为5位羟基质子信号；低场区有3组氢信号，δ 7.59（1H，d，J=2.5 Hz），δ 6.84（1H，d，J=9.0 Hz）和δ 7.58（1H，dd，J=9.0，2.5 Hz）提示结构B环中存在一个ABX自旋耦合系统的苯环，则各自为H-2′，H-5′和H-6′。糖区信号：δ 5.46（1H，d，J=7.0 Hz，H-1"），δ 3.24（1H，m，H-2"），δ 3.24（1H，m，H-3"），δ 3.10（1H，m，H-4"），δ 3.10（1H，m，H-5"），δ 3.58（1H，d，J=11.0 Hz，H-6a"）和δ 3.33（1H，m，H-6b"）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）谱中总共有21个碳信号，其中一组信号δ[100.8、74.0、76.4、69.8、77.5、60.9]提示结构中存在1个葡萄糖取代基。δ 177.3（-C=O），δ 133.2（C-3）提示葡萄糖与C-3相连，核磁数据（见表 1）与文献数据[7]对比，基本一致，确定该化合物为槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
| 序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
| 2 | 156.0 | 155.2 | 156.2 | 156.3 | 156.4 | 156.5 | 164.2 |
| 3 | 133.2 | 132.9 | 132.9 | 133.1 | 133.1 | 133.5 | 103.2 |
| 4 | 177.3 | 177.3 | 176.9 | 177.1 | 177.3 | 177.5 | 181.9 |
| 5 | 161.1 | 161.2 | 161.1 | 161.1 | 161.1 | 160.8 | 161.0 |
| 6 | 98.6 | 98.5 | 98.9 | 98.8 | 98.8 | 97.8 | 99.4 |
| 7 | 164.1 | 163.9 | 165.1 | 164.4 | 159.8 | 164.9 | 162.9 |
| 8 | 93.4 | 93.3 | 93.6 | 93.6 | 93.7 | 92.0 | 94.9 |
| 9 | 156.2 | 156.1 | 156.3 | 156.5 | 156.1 | 156.2 | 156.9 |
| 10 | 103.8 | 103.7 | 103.4 | 103.8 | 103.6 | 104.9 | 105.3 |
| 1′ | 121.1 | 121.1 | 120.7 | 121.6 | 120.8 | 120.9 | 120.5 |
| 2′ | 116.1 | 115.7 | 115.9 | 116.0 | 130.9 | 116.3 | 110.2 |
| 3′ | 144.7 | 144.8 | 144.9 | 144.9 | 114.9 | 144.8 | 148.1 |
| 4′ | 148.4 | 148.4 | 148.7 | 148.6 | 159.9 | 148.6 | 151.2 |
| 5′ | 155.1 | 115.1 | 115.1 | 115.1 | 114.9 | 115.1 | 115.8 |
| 6′ | 121.5 | 122.2 | 121.5 | 120.8 | 130.9 | 121.5 | 121.0 |
| 1″ | 100.8 | 98.2 | 101.3 | 101.5 | 100.7 | 100.7 | 99.9 |
| 2″ | 73.9 | 79.7 | 73.7 | 73.7 | 71.1 | 73.9 | 73.1 |
| 3″ | 76.4 | 73.5 | 75.5 | 75.6 | 73.0 | 76.4 | 76.4 |
| 4″ | 69.8 | 67.6 | 71.3 | 71.3 | 67.8 | 69.8 | 69.5 |
| 5″ | 77.5 | 76.1 | 75.6 | 75.7 | 75.7 | 77.5 | 76.4 |
| 6″ | 60.9 | 59.9 | 168.8 | 168.3 | 60.1 | 60.9 | 60.6 |
| 1′″ | － | 104.6 | － | － | － | － | － |
| 2′″ | － | 73.8 | － | － | － | － | － |
| 3′″ | － | 75.8 | － | － | － | － | － |
| 4′″ | － | 69.3 | － | － | － | － | － |
| 5′″ | － | 65.6 | － | － | － | － | － |
| -CH2- | － | － | － | 60.5 | － | － | － |
| -CH3 | － | － | － | 13.7 | － | － | － |
| -OCH3 | － | － | 51.7 | － | － | － | 55.9 |
| Notes: Measured in DMSO-d6。 | |||||||
化合物2：黄色粉末，TLC板上，紫外灯254 nm下有一明显暗斑，用体积分数为10%的硫酸乙醇溶液显色呈亮黄色，推测其可能为黄酮类化合物。高分辨Q-TOF-MS给出其准分子离子峰m/z 597.144 6[M+H]+，确定其分子式为C26H28O16（Calcd. 597.1450）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）最低场区的δ 12.70提示结构中存在5-OH，低场区有3组氢信号，δ 7.52（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），δ 6.82（1H，d，J=8.5 Hz，H-5′）和δ 7.76（1H，dd，J=8.5，2.0 Hz，H-6′）提示结构B环中存在一个ABX自旋耦合系统的苯环。碳谱中总共有26个碳信号，黄酮母核有15个碳，所以推测该化合物有两个糖。δ 177.3（-C=O），δ 132.9（C-3）提示糖基与C-3相连，通过HMBC可以看出半乳糖基的端基氢δ 5.69（1H，d，J=8.0 Hz）与δ 132.9（C-3）相关，木糖端基氢δ 4.55（1H，d，J=7.5 Hz）与半乳糖2位δ 79.7（C-2"）相关，可以推出木糖1位与半乳糖2位相连。核磁数据（见表 1）与参考文献[8]对照，基本一致，确定该化合物2为槲皮素-3-O-β-D-吡喃木糖－（1→2）－β-D-吡喃半乳糖苷。
化合物3：黄色粉末，TLC板上，紫外灯254 nm下有一明显暗斑，用体积分数为10%的硫酸乙醇溶液呈亮黄色，推测其可能为黄酮类化合物。高分辨Q-TOF-MS给出其准分子离子峰m/z 493.097 5[M+H]+，确定其分子式为C22H20O13（Calcd. 493.097 7）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）谱中，最低场区δ 12.53为一个单峰，为5位羟基质子信号；低场区有3组氢信号，δ 7.51（1H，d，J=2.0 Hz），δ 6.83（1H，d，J=8.0 Hz）和δ 7.57（1H，dd，J=2.0，8.0 Hz）提示结构B环中存在一个ABX自旋耦合系统的苯环，分别为H-2′，H-5′和H-6′。糖区信号：δ 5.46（1H，d，J=7.5 Hz，H-1"），δ 3.31（1H，m，H-2"），δ 3.30（1H，m，H-3"），δ 3.38（1H，m，H-4"），δ 3.30（1H，m，H-5"）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）谱中总共有21个碳信号，其中一组信号δ[101.3、73.7、75.5、71.3、75.6、168.8]提示结构中存在1个葡萄糖取代基，但是葡萄糖中各碳的化学位移均有改变，提示葡萄糖苷中连有其它基团。δ 176.9（-C=O），δ 132.9（C-3）提示葡萄糖与C-3相连。在中高场δ 51.7提示结构中存在一个甲氧基，由HMBC可知，甲氧基与结构中葡萄糖苷δ 168.8（C-6"）有相关，可确定甲氧基与其相连。核磁数据（见表 1）与文献数据[9]对比，基本一致，确定该化合物为槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸-6″-甲酯。
化合物4：黄色粉末，TLC板上，紫外灯254 nm下有一明显暗斑，用体积分数为10%的硫酸乙醇溶液呈亮黄色，推测其可能为黄酮类化合物。高分辨Q-TOF-MS给出其准分子离子峰m/z 507.1137[M+H]+，确定其分子式为C23H22O13（Calcd. 507.113 3）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）谱中，最低场区δ 12.55为一个单峰，为5位羟基质子信号；低场区有3组氢信号，δ 7.54（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），δ 6.85（1H，d，J=8.0 Hz，H-5′）和δ 7.60（1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-6′）提示结构B环中存在一个ABX自旋耦合系统的苯环。糖区信号：δ 5.45（1H，d，J=7.5 Hz，H-1"），δ 3.32（1H，m，H-2"），δ 3.30（1H，m，H-3"），δ 3.40（1H，m，H-4"），δ 3.32（1H，m，H-5"）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）谱中总共有21个碳信号，其中一组信号δ[101.5、73.7、75.6、71.3、75.7、168.3]提示结构中存在1个葡萄糖取代基，但是葡萄糖中各碳的化学位移均有改变，提示葡萄糖苷中连有其它基团。δ 177.1（-C=O），δ 133.1（C-3）提示葡萄糖与C-3相连。中高场δ 60.5为一个CH2信号，高场δ 13.7为一个CH3信号，根据HSQC可知它们有相关，也与结构中葡萄糖苷δ 168.8（C-6″）有相关，可确定与其相连。核磁数据（见表 1）与文献数据[10]对比，基本一致，确定该化合物为槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸-6″-乙酯。
化合物5：黄色粉末，TLC板上，紫外灯254 nm下有一明显暗斑，用体积分数为10%的硫酸乙醇溶液呈亮黄色，推测其可能为黄酮类化合物。高分辨Q-TOF-MS给出其准分子离子峰m/z 449.107 0[M+H]+，确定其分子式为C21H20O11（Calcd. 449.107 8）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）最低场区的δ 12.59提示结构中存在5-OH，低场区有2组氢信号，δ 8.06（2H，d，J=8.5 Hz），δ 6.86（2H，d，J=8.5 Hz）提示结构B环中存在一个AA′BB′自旋耦合系统的苯环，各自为H-2′，H-3′，H-5′和H-6′。中高场区δ 5.39（1H，d，J=7.5 Hz，H-1"）为半乳糖端基氢信号。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）谱中总共有21个碳信号，其中一组信号δ[101.7、71.1、73.0、67.8、75.7、60.1]提示结构中存在1个半乳糖取代基。δ 177.3（-C=O），δ 133.1（C-3）提示半乳糖与C-3相连，核磁数据（见表 1）与文献数据[11]对比，基本一致，确定该化合物为山奈酚-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷。
化合物6：黄色粉末，TLC板上，紫外灯254 nm下有一明显暗斑，用体积分数为10%的硫酸乙醇溶液呈亮黄色，推测其可能为黄酮类化合物。高分辨Q-TOF-MS给出其准分子离子峰m/z 479.118 5[M+H]+，确定其分子式为C22H22O12（Calcd. 475.1184）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）谱中，最低场区δ 12.65为一个单峰，为5位羟基质子信号；低场区有3组氢信号：δ 7.61（1H，d，J=1.5Hz），δ 6.86（1H，d，J=8.5 Hz）和δ 7.62（1H，dd，J=1.5，8.5 Hz）提示结构B环中存在1个ABX自旋耦合系统的苯环，分别为H-2′，H-5′和H-6′。糖区信号：δ 5.49（1H，d，J=7.0 Hz，H-1"），δ 3.25（1H，m，H-2"），δ 3.24（1H，m，H-3"），δ 3.12（1H，m，H-4"），δ 3.11（1H，m，H-5"），δ 3.59（1H，d，J=11.0 Hz，H-6"a）和δ 3.35（1H，m，H-6"b）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）谱中总共有21个碳信号，其中一组信号δ[100.7、73.9、76.4、69.8、77.5、60.9]提示结构中存在1个葡萄糖取代基。δ 177.5（-C=O），δ 133.5（C-3）提示葡萄糖与C-3相连。在中高场δ 56.0提示结构中存在一个甲氧基，由HMBC可知，甲氧基与结构中A环的δ 164.9（C-7）有相关，可确定甲氧基与其相连。核磁数据（见表 1）与文献数据[12]对比，基本一致，确定该化合物为鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
化合物7：黄色粉末，TLC板上，紫外灯254 nm下有一明显暗斑，用体积分数为10%的硫酸乙醇溶液显色呈亮黄色，推测其可能为黄酮类化合物。高分辨Q-TOF-MS给出其准分子离子峰m/z 463.123 1[M+H]+，确定其分子式为C22H22O11（Calcd. 463.1235）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）最低场区的δ 12.98提示结构中存在5-OH，低场区有1组ABX耦合氢信号：δ 7.59（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），δ 6.94（1H，dd，J=2.0，8.5 Hz，H-5′）和δ 7.59（1H，d，J=8.5 Hz，H-6′）。中低场区有一个d峰：δ 5.05（1H，d，J=9.0 Hz，H-1"）为葡萄糖的端基氢信号。在中高场区δ 3.26-3.50（5H，m，H-2"，3"，4"，5"，6" a）和δ 3.72（1H，d，H-6"b）为葡萄糖的氢信号。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）谱中总共有22个碳信号，其中一组信号δ[99.9、73.1、76.4、69.5、76.4、60.6]提示结构中存在1个葡萄糖取代基。在中高场δ 55.9提示结构中存在1个甲氧基，由HMBC可知，甲氧基与结构中B环中δ 148.1（C-3′）有相关，可确定甲氧基与其相连。核磁数据（见表 1）与文献数据[13]对比，基本一致，确定该化合物为柯伊利素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
化合物8：淡黄色油状物，TLC板上，紫外灯254 nm下有一暗斑，用体积分数为10%的硫酸乙醇溶液显色呈紫色。[α]D23：+11.21°（c0.53，MeOH）。高分辨Q-TOF-MS给出其准分子离子峰m/z 543.183 0 [M+Na]+，确定其分子式为C26H32O11（Calcd. 543.1837）。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）谱中，在低场区δ 6.7~7.2范围内有6组氢信号：δ 6.76（1H，d，J=8.0 Hz，H-5′）、δ 6.80（1H，d，J=8.5 Hz，H-6′）、δ 6.91（1H，d，J=8.5 Hz，H-6）、δ 6.94（1H，s，H-2′）、δ 7.02（1H，s，H-2）、δ 7.14（1H，d，J=8.5 Hz，H-5），提示结构中存在两个1，3，4取代的苯环。在中高场区有一个明显的d峰，根据峰面积及HSQC可知是两个单峰重叠，分别为δ 3.85（3H，s，-OCH3）、δ 3.86（3H，s，-OCH3），为两个甲氧基的氢信号。δ 3.85（2H，m，H-9）和δ 3.49（2H，m，H-9′）为两个亚甲基的氢信号；δ 3.12（2H，s，H-8，8′）和δ 4.70（2H，d，J=4.0 Hz，H-7′）、δ 4.75（2H，d，J=3.5 Hz，H-7）为两个次甲基的氢信号。糖区信号：δ 4.87（1H，s，H-1"），δ 3.48（1H，m，H-2"），δ 3.47（1H，m，H-3"），δ 3.44（1H，m，H-4"），δ 3.44（1H，m，H-5"），δ 3.85（1H，m，H-6" a），δ 4.23（1H，m，H-6"b）。13C-NMR（125 MHz，CD3OD）谱中显示有26个碳信号，其中一组信号δ（102.9、75.0、77.9、71.4、78.2、62.6）提示结构中存在1个葡萄糖取代基，由HMBC可知葡萄糖基与C-4有相关，可知它们相连。在中高场区δ 56.5和56.8为两个甲氧基上的碳信号，结合HMBC可知两个甲氧基分别连在C-3及C-3′上。核磁数据（见表 2）与文献数据[14]对比，基本一致，确定该化合物为（+）－松脂醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
| 序号 | 1H-NMR | 13C-NMR | |||
| 8 | 9 | 8 | 9 | ||
| 1 | － | － | 137.5 | 137.6 | |
| 2 | 7.02（1H，s） | 7.03（1H，d，1.5） | 111.7 | 111.6 | |
| 3 | － | － | 147.5 | 147.6 | |
| 4 | － | － | 151.0 | 151.0 | |
| 5 | 7.14（1H，d，8.5） | 7.14（1H，d，8.5） | 118.1 | 118.1 | |
| 6 | 6.91（1H，d，8.5） | 6.91（1H，dd，1.5，7.0） | 119.8 | 119.9 | |
| 7 | 4.75（2H，d，3.5） | 4.47（2H，d，6.5） | 87.1 | 89.1 | |
| 8 | 3.12（2H，s） | 2.92（2H，dd，6.5，9.0） | 55.4 | 55.8 | |
| 9 | 3.85（2H，m） | 3.86（2H，m） | 72.7 | 72.0 | |
| 1′ | － | － | 113.8 | 131.3 | |
| 2′ | 6.94（1H，s） | 6.96（1H，s） | 111.1 | 110.6 | |
| 3′ | － | － | 147.4 | 148.9 | |
| 4′ | － | － | 149.2 | 146.7 | |
| 5′ | 6.76（1H，d，8.0） | 6.77（1H，d，8.0） | 116.1 | 116.1 | |
| 6′ | 6.80（1H，d，8.5） | 6.80（1H，d，8.0） | 120.1 | 119.4 | |
| 7′ | 4.70（2H，d，4.0） | 4.87（2H，d，7.0） | 87.5 | 83.6 | |
| 8′ | 3.12（2H，s） | 3.39（2H，m） | 55.6 | 51.3 | |
| 9′ | 3.49（2H，m） | 3.41（2H，m） | 72.7 | 70.8 | |
| 1" | 4.87（1H，s） | 4.89（1H，s） | 102.9 | 102.9 | |
| 2" | 3.48（1H，m） | 3.48（1H，m） | 75.0 | 74.9 | |
| 3" | 3.47（1H，m） | 3.47（1H，m） | 77.9 | 77.9 | |
| 4" | 3.44（1H，m） | 3.44（1H，m） | 71.4 | 71.4 | |
| 5" | 3.44（1H，m） | 3.44（1H，m） | 78.2 | 78.2 | |
| 6" | 3.85（1H，m） | 3.85（1H，m） | 62.6 | 62.5 | |
| 4.23（1H，m） | 4.23（1H，m） | ||||
| -OCH3 | 3.85（3H，s） | 3.86（3H，s） | 56.5 | 56.4 | |
| -OCH3 | 3.86（3H，s） | 3.87（3H，s） | 56.8 | 56.8 | |
| Notes: Measured in CD3OD。 | |||||
化合物9：淡黄色油状物，TLC板上，紫外灯254 nm下有一暗斑，用体积分数为10%的硫酸乙醇溶液显色呈紫色。[α]D23：+22.73°（c0.22，MeOH）。高分辨Q-TOF-MS给出其准分子离子峰m/z 565.1926[M+COOH]-，确定其分子式为C26H32O11（Calcd. 565.192 7）。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）谱中，在低场区δ 6.7~7.2范围内有6组氢信号：δ 6.77（1H，d，J=8.0 Hz，H-5′）、δ 6.80（1H，d，J=8.0 Hz，H-6′）、δ 6.91（1H，dd，J=1.5，7.0 Hz，H-6）、δ 6.96（1H，s，H-2′）、δ 7.03（1H，d，J=1.5 Hz，H-2）、δ 7.14（1H，d，J=8.5 Hz，H-5），提示结构中存在两个1，3，4取代的苯环。在中高场区有一个明显的d峰，根据峰面积及HSQC可知是两个单峰重叠，分别为δ 3.86（3H，s，-OCH3）、δ 3.87（3H，s，-OCH3），为两个甲氧基的氢信号。δ 3.86（2H，m，H-9）和δ 3.41（2H，m，H-9′）为两个亚甲基的氢信号；δ 3.39（2H，m，H-8′）、δ 2.92（2H，dd，J=6.5，9.0 Hz，H-8）和δ 4.47（2H，d，J=6.5 Hz，H-7）、δ 4.87（2H，d，J=7.0 Hz，H-7′）为两个次甲基的氢信号。糖区信号：δ 4.89（1H，s，H-1"），δ 3.48（1H，m，H-2"），δ 3.47（1H，m，H-3"），δ 3.44（1H，m，H-4"），δ 3.44（1H，m，H-5"），δ 3.85（1H，m，H-6"a），δ 4.23（1H，m，H-6"b）。13C-NMR（125 MHz，CD3OD）谱中显示有26个碳信号，其中一组信号δ[102.9、75.0、77.9、71.4、78.2、62.5]提示结构中存在1个葡萄糖取代基，由HMBC可知葡萄糖基与C-4′有相关，可知它们相连。在中高场区δ 56.4和56.8为两个甲氧基上的碳信号，结合HMBC可知两个甲氧基分别连在C-3及C-3′上。核磁数据（见表 2）与文献数据[15]对比，基本一致，确定该化合物为（+）－表松脂醇-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，与化合物8为同分异构体。
| [1] | 国家药典委员会. 中华人民共和国药典[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2015: 275-276 |
| [2] | 夏明辉, 赵晶, 韩立峰, 等. 荷叶化学及药理学研究进展[J]. 辽宁中医药大学学报, 2015, 17(11): 102–104. |
| [3] | 周健鹏. 荷叶化学成分和药理作用研究进展[J]. 天津药学, 2014, 26(2): 65–68. |
| [4] | 彭双, 韩立峰, 刘二伟, 等. 荷叶中化学成分的分离与鉴定[J]. 沈阳药科大学学报, 2012, 29(7): 519–524. |
| [5] | 马迪, 彭双, 韩立峰, 等. 荷叶中化学成分的分离与鉴定(Ⅱ)[J]. 沈阳药科大学学报, 2014, 31(5): 355–359. |
| [6] | 夏明辉, 彭双, 赵晶, 等. 荷叶中化学成分的分离与鉴定(Ⅲ)[J]. 天津中医药大学学报, 2015, 34(2): 96–99. DOI:10.11656/j.issn.1673-9043.2015.02.08 |
| [7] | Han JT, Bang MH, Chun OK, et al. Flavonol glycosides from the aerial parts of Aceriphyllum rossii and their antioxidant activities[J]. Archives of pharmacal research, 2004, 27(4): 390–395. DOI:10.1007/BF02980079 |
| [8] | Iwaoka E, Oku H, Takahashi Y, et al. Allergy-preventive effects of Hibiscus mutabilis 'Versicolor' and a novel allergy-preventive flavonoid glycoside[J]. Biological & Pharmaceutical Bulletin, 2009, 32(3): 509–512. |
| [9] | Ma F, Onoda T, Li W, et al. A new flavonoid glycoside and other chemical constituents from leaves of Rosa davurica and their antioxidant activity[J]. Natural product research, 2013, 27(23): 2178–2182. DOI:10.1080/14786419.2013.811408 |
| [10] | 刘涛, 马龙, 赵军, 等. 琐琐葡萄化学成分研究[J]. 天然产物研究与开发, 2010, 22(6): 1009–1011. |
| [11] | Jung MJ, Chung HY, Choi JH, et al. Antioxidant principles from the needles of red pine, Pinus densi ora[J]. Phytotherapy Research, 2003, 17(9): 1064–1068. DOI:10.1002/(ISSN)1099-1573 |
| [12] | Miliauskas G, van Beek TA, Venskutonis PR, et al. Antioxidant activity of Potentilla fruticosa[J]. Journal of the Science of Food and Agriculture, 2004, 84(15): 1997–2009. DOI:10.1002/jsfa.v84:15 |
| [13] | Harput US, Çalişi, Saracoglu I, et al. Secondary metabolites from Phlomis syriaca and their antioxidant activities[J]. Turkish Journal of Chemistry, 2006, 30(3): 383–390. |
| [14] | Kim DK, Lim JP, Kim JW, et al. Antitumor and antiinflammatory constituents from Celtis sinensis[J]. Archives of pharmacal research, 2005, 28(1): 39–43. DOI:10.1007/BF02975133 |
| [15] | Rahman MMA, Dewick PM, Jackson DE, et al. Lignans of Forsythia intermedia[J]. Phytochemistry, 1990, 29(6): 1971–1980. DOI:10.1016/0031-9422(90)85050-P |