国家食品药品监督管理局规定，化学药品和生物制品的有效期是指药品在规定的贮藏条件下，质量能够符合规定要求的期限；或者说，药品在规定的贮藏条件下，其含量下降到90%所需要的时间。而对中药的有效期并没有明确规定。为保障临床用药的安全有效，研究制定中药有效期至关重要^[1-5]。

山茱萸为山茱萸科植物山茱萸（Cornus officinalis Sieb. etZucc）的干燥成熟果肉。味酸、涩，微温，归肝、肾经。其功效为补益肝肾，涩精固脱。临床用于内热消渴，眩晕耳鸣，腰膝酸痛，阳痿遗精，遗尿、尿频，崩漏带下，大汗虚脱等，是中医临床常用的抗衰老药物之一^[6]。为考察山茱萸饮片的有效期，笔者依据2015版《中国药典》以马钱苷、莫诺苷和浸出物量为指标，通过加速实验和留样观察实验^[7]，采用综合加权评分法^[8]对其3个指标进行综合评价，使预测出的山茱萸饮片有效期更加真实。

1 材料与仪器 1.1 研究对象

山茱萸购于天津中药饮片厂（批号1506024），产地河南。山萸肉：除去杂质和残留果核。酒萸肉：按黄酒用量25%，闷润2 h，蒸制4 h的方法炮制，取出，烘干即得。

1.2 仪器

岛津LC-2010AHT高效液相色谱系统，LC solution工作站；Kromasil C₁₈柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；BPS~100CH恒温恒湿箱（上海一恒科学仪器有限公司）；FW100高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；FA210电子分析天平（上海舜宇恒科学仪器有限公司）；KQ-300B超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；SFY-20红外快速水分测定仪（深圳市冠亚电子科技有限公司）。

1.3 试剂

马钱苷对照品（批号111640-200604），莫诺苷对照品（批号111640-200605）均购自中国药品生物制品检验所，供含量测定用。甲醇为色谱纯，其余所用试剂均为分析纯，市售。

2 方法与结果 2.1 色谱条件

Kromasil C₁₈柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：甲醇-0.1%甲酸水（24:56），流速：0.8 mL/min，检测波长：240 nm，柱温：35 ℃，进样量10 μL。上述色谱条件下，各组分分离度良好，高效液相色谱（HPLC）图见图 1。

2.2 对照品溶液配制

精密称取马钱苷5.08 mg、莫诺苷4.98 mg，分别加甲醇溶解并定容至5 mL，各取0.25 mL至5 mL容量瓶，加80%甲醇定容，最终得到含马钱苷0.050 8 g/L、莫诺苷0.049 8 g/L的混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液配制

取本品粉末（过三号筛）约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇25 mL，称定质量，超声45 min（功率250 W，频率35 kHz），放冷，再称定质量，用80%甲醇补足减失的质量，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.4 方法学考察 2.4.1 线性关系考察

精密吸取马钱苷和莫诺苷对照品溶液，用80%甲醇稀释成0.12、0.08、0.04、0.02、0.01、0.005、0.002 5 g/L的系列混合对照品溶液，进样10 μL，按2.1项下色谱条件测定峰面积，以对照品质量浓度为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（），得到各成分的回归方程、相关系数分别为马钱苷=18 241X+1 026.6，r=0.999 8；莫诺苷=20 627X+1 107.4，r=0.998 9。表明马钱苷和莫诺苷在0.025~1.2 μg呈良好线性关系。

2.4.2 稳定性实验

取酒萸肉粉末，按2.3项下方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h进样，测定各成分峰面积。结果马钱苷和莫诺苷峰面积RSD值分别为1.13%和0.44%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.4.3 精密度实验

精密吸取2.2项下混合对照品溶液10 μL，重复进样6次，测定各成分色谱峰峰面积。结果马钱苷和莫诺苷峰面积的RSD分别为0.97%和0.85%，表明仪器精密度良好。

2.4.4 重复性实验

取同一酒萸肉粉末6份，按2.3项下方法制备供试品溶液，进样，测定马钱苷和莫诺苷含量。结果马钱苷和莫诺苷RSD值分别为1.83%和1.68%。表明该方法重复性良好。

2.4.5 加样回收率实验

精密称取6份已知含量的酒萸肉粉末约0.1 g，按照表加入马钱苷和莫诺苷的对照品溶液，按2.3项下方法制备供试品溶液，进样，测定马钱苷和莫诺苷含量，计算回收率，见表 1，结果表明该方法回收率良好。

3 实验内容及结果 3.1 加速实验 3.1.1 样品制备

将山萸肉和酒萸肉按市售包装（密封于小包装袋中），置于相对湿度为（75±5）%、温度（40± 2）℃的恒温恒湿箱中放置6个月，分别于0（1个月内）、1、2、3、4、5、6个月取样，每次3份，研成粉末备用。

3.1.2 水分测定

采用红外快速水分测定仪测定。

3.1.3 浸出物量测定

按水溶性浸出物测定法项下冷浸法（2015年版四部通则2201）以水为溶剂测定浸出物量。

3.1.4 含量测定

按2.3项下制成供试品溶液，进样测定。含量和浸出物量以去除水分折合后的干燥品计算。

3.1.5 数据处理

综合加权评分的计算方法：根据莫诺苷、马钱苷含量和浸出物量测定结果，分别赋以A、B、C系数，即综合评分OD=45×Ai/AMAX+45×B_i/B_MAX+10×C_i/C_MAX（总分以100计）。以OD均值进行直观综合分析，数据结果见表 2，山萸肉和酒萸肉加权前后均值图见图 2。

从表 2和图 2可以看出，山萸肉0~2个月和4~6个月OD均值呈递减趋势，下降率分别为9.13%和6.23%；2~4个月OD均值呈递增趋势，增长率为6.06%，0~6个月总体下降率为9.3%。酒萸肉0~2个月、3~4个月和5~6个月，OD均值呈现递增趋势，增长率分别为8.67%、6.04%和2.42%，2个月OD均值达到极大值；2~3个月和4~5个月OD均值呈递减趋势，下降率分别为9.91%和8.29%，0~6个月总体下降率为1.07%。综合评价山萸肉和酒萸肉下降率均低于10%，总含量和浸出物量符合2015版《中国药典》规定要求。

3.2 长期实验

将酒萸肉按市售包装（密封于小包装袋中），放置于室温，每3个月取样1次，分别于0、3、6、9、12、18、24、36个月取样分析（按加速实验项下步骤测定样品含量和浸出物量）。长期实验正在进行中。数据结果见表 3，加权前后的均值图见图 3。

从表 3和图 3可以看出，0~3个月和6~12个月，OD均值呈递减趋势，下降率分别为3.37%和19.83%；3~6个月OD均值呈递增趋势，增长率为9.89%，6个月OD均值达到极大值；0~12个月总体下降率为13.31%，大于10%，但总含量和浸出物量仍符合2015版《中国药典》规定要求。

4 小结 4.1 山茱萸初始、加速实验和留样观察实验前后性状描述

山茱萸呈不规则的片状或囊状，山萸肉表面紫红色，皱缩，有光泽，研粉，粉末呈红棕色。经加速实验后，表面颜色由紫红色逐渐变为紫黑色，质变柔软，研粉，粉末由红棕色逐渐变为红褐色。酒萸肉表面黑色，有光泽，研粉，粉末红褐色，微有酒香气。经加速实验和留样观察后，颜色变化不明显，酒香气减弱，质滋润柔软。山萸肉较酒萸肉变化明显，实验前后的性状变化均在药典要求范围内。

4.2 加速实验和留样观察实验结果分析

对山萸肉和酒萸肉均做了加速实验，比较2种饮片稳定性差异，综合加权结果酒萸肉较山萸肉下降率低，稳定性更好；而且临床应用主要以酒萸肉为主，因此，留样观察实验仅选择了酒萸肉。

莫诺苷和马钱苷是环烯醚萜类的2个主要活性成分，从功效上看，马钱苷的药理报道较多，如马钱苷的苷元马钱素对免疫反应有双向调节作用和抗休克作用^[9]。可见，马钱苷的功效高于莫诺苷。从含量上看，莫诺苷高于马钱苷。从功效和含量两方面考虑，莫诺苷和马钱苷评分相当，高于浸出物，因此，将两者权重系数定为45%，浸出物量权重系数定为10%。

加速实验研究山茱萸中有效成分莫诺苷、马钱苷含量及浸出物量随时间增加的化学成分反应变化过程，满足阿累尼乌斯（Arrhenius）定律的适用条件（用于化学反应速度研究）。40 ℃加速实验6个月，山萸肉OD均值总体下降率为9.3%，酒萸肉总体下降率为1.07%，下降率均小于10%。再根据加速实验的“活化能估算法”^[10]（大多数药物降解反应活化能在41.86~83.72 kJ/mol之间，可估算出某一温度下，样品加速实验含量不低于起始量的90%时所对应的室温下的有效期）预测山茱萸饮片常温下的有效期可能为2 a。留样观察实验12个月酒萸肉的OD均值下降率为13.31%，高于10%，但总含量和浸出物量仍符合2015版《中国药典》要求。可能是室温下的温度、湿度不恒定所致，酒萸肉具体有效期有待后面留样观察实验数据的进一步验证。