2017, Vol. 36文章信息
- 闫彦, 赵静, 孙磊, 郭江玉, 余河水, 李薇, 张丽娟, 宋新波
- YAN Yan, ZHAO Jing, SUN Lei, GUO Jiang-yu, YU He-shui, LI Wei, ZHANG Li-juan, SONG Xin-bo
- 蒙药蒙古鸦葱化学成分的研究
- Study on the chemical constituents of Scorzonera mongolica Maxim.
- 天津中医药大学学报, 2017, 36(6): 470-473
- Journal of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, 2017, 36(6): 470-473
- http://dx.doi.org/10.11656/j.issn.1673-9043.2017.06.17
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文章历史
收稿日期: 2017-08-28
2. 天津滨海新区中医院, 天津 300450
2. Tianjin Binhai New Area Traditional Chinese Medicine Hospital, Tianjin 300450, China
蒙古鸦葱（Scorzonera mongolica Maxim.）隶属于菊科（Compositae）舌状花亚科（Subfam.Liguliflorae DC.Cichorioideae Kitam）鸦葱属（Scorzonera L.）。又名羊角菜、羊犄角，味苦、辛，性寒，归心经。蒙古鸦葱作为内蒙古民间传统用药，药用历史悠久。具有清热解毒、散结消肿的功效，临床上可用于治疗毒疮、乳痛、跌打损伤等。《内蒙古中草药》记载其能清热解毒，治疗毒恶疮，近有试用于治疗胃癌，甲状腺癌[1-6]。全世界鸦葱属植物共有150余种，多分布于欧亚大陆半干旱和干旱地区[7]。在中国已发现有29种3变种，主要分布于西北地区[8]。近年来，国内外学者们对鸦葱属植物的化学成分进行了较为系统的研究，从中分离得到的成分主要为萜类及其衍生物、酚酸、黄酮及其苷类、木脂素、香豆素等。而该属植物中蒙古鸦葱的化学成分研究则相对较少，文献报道的化合物中以黄酮类和三萜类及其衍生物为主，具有药理活性的酚酸类化合物的分离研究较少。为深入研究蒙药蒙古鸦葱的药理作用，为该植物活性成分的筛选提供依据，本研究利用硅胶柱、反向ODS、Sephadex LH-20柱色谱和重结晶等技术手段对蒙古鸦葱根部95%乙醇提取物中所含化学成分进行了分离纯化，共得到19个单体。利用核磁共振波谱技术对所得到的19个单体进行结构鉴定，其中包括3个奎宁酸衍生物类（化合物1~3），8个酚酸类（化合物4~11），2个黄酮类（化合物12~13），3个甾体（化合物14~16），及3个脂肪酸（化合物17~19）。其中化合物1~3为该植物首次分离得到的奎宁酸衍生物类化合物。
1 仪器、试剂与材料柱层析硅胶（GF254，200~300目，青岛海洋化工有限公司）；薄层层析硅胶（GF254，10~40 μm，青岛海洋化工有限公司）；Sephadex LH-20（25~100 μm）（Pharmacia Fine Chemical Co. Ltd.）；ODS色谱硅胶（ODS-A 50 μm，12 nm GH GEL）；中压制备液相色谱仪（天津博纳艾杰尔CHEETAHTM HP）；高效液相色谱仪（美国安捷伦Agilent 1260），色谱柱（资生堂TechMate C18-ST，4.6 mm×250 mm，5 μm）；ODS C18（1 000 mg/6 mL，天津博纳艾杰尔）；核磁共振仪：Varian Mercury-300 MHz，Bruker-400 MHz，Varian Inova-400 MHz。氘代试剂：CDCl3（Sigma公司，批号225789），（CD3）2CO（Sigma公司，批号175862），CD3OD（Sigma公司，批号224878）。石油醚（60~90 ℃）、四氯化碳、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、正丁醇等试剂均为分析纯（天津康科德科技有限公司）。
药材蒙古鸦葱采自甘肃嘉峪关，由天津中医药大学李天祥教授鉴定为蒙古鸦葱（S. mongolica Maxim.）。
2 提取与分离 2.1 提取将蒙古鸦葱干燥药材根部，粉碎，取5.0 kg，95%乙醇加热回流提取3次，每次2 h，滤过，合并滤液，减压回收溶剂，浓缩得浸膏约575 g[9]。将浸膏混溶于2 L水中，分别用等体积的乙酸乙酯、正丁醇萃取。乙酸乙酯萃取层得浸膏约143 g，正丁醇萃取层得浸膏约47 g，水层得浸膏约385 g。
2.2 分离纯化乙酸乙酯萃取部分浸膏用220 g硅胶（200~300目）拌样，200~300目硅胶装柱，以四氯化碳/丙酮（1:0~0:1，v/v）和纯甲醇进行梯度洗脱，得到8个组分（Fr.1~Fr.8）。Fr.1和Fr.6经重结晶（石油醚/丙酮）得到化合物15（约1 g）和化合物16（约1 g）。
Fr.2经硅胶柱色谱层析（石油醚-乙酸乙酯），得到9个组分（Fr.2-1~Fr.2-9）。Fr.2-3经硅胶柱色谱层析[石油醚-乙酸乙酯（10:1~1:1，v/v）]及ODS柱色谱层析[MeOH-H2O（20:80，100:0）]，得到化合物19（14.0 mg）。
Fr.3经硅胶柱色谱层析[石油醚-乙酸乙酯（6:1，3:1，1:1，v/v）]，得到8个组分（Fr.3-1~Fr.3-8）。Fr.3-3经硅胶柱色谱层析[四氯化碳-乙酸乙酯（20:1）]及Sephadex LH-20柱层析[CH2Cl2-MeOH（7:3）]，得到化合物14（25.0 mg）；Fr.3-4通过硅胶柱色谱层析[四氯化碳-乙酸乙酯（10:1~1:1）]及Sephadex LH-20柱层析，得到化合物9（17.0 mg）与化合物10（13.0 mg）；Fr.3-5经硅胶柱色谱层析[石油醚-乙酸乙酯（3:1~1:1）]及ODS柱色谱层析[MeOH-H2O（20:80，100:0）]，得到化合物18（35.0 mg）；Fr.3-6经硅胶柱色谱层析[石油醚-乙酸乙酯（3:1-1:1）]及ODS柱色谱层析[MeOH-H2O（20:80，100:0）]，得到化合物17（31.0 mg）；Fr.3-7通过硅胶柱色谱层析[四氯化碳-乙酸乙酯（10:1-1:1）→石油醚-丙酮（10:1~1:1）]及反相中压制备液相色谱（甲醇-三氟乙酸），得到化合物6（17.0 mg），化合物5（21.0 mg）和化合物7（19.0 mg）；Fr.3-8经硅胶柱色谱层析[四氯化碳-乙酸乙酯（10:1~1:1）→石油醚-丙酮（10:1~1:1）]及Sephadex LH-20柱层析，得到化合物12（19.0 mg）和化合物13（17.0 mg）。
Fr.4经硅胶色谱柱层析[四氯化碳-甲醇（20:1~1:1）]得到5个组分（Fr.4-1~Fr.4-5）。Fr.4-1经硅胶柱色谱层析[四氯化碳-丙酮（8:1~1:1）→四氯化碳：甲醇（20:1~5:1）]及ODS柱色谱层析[MeOH-H2O（25:75，100:0）]，分别得到化合物8（13.0 mg）和化合物11（18.0 mg）；Fr.4-2经硅胶柱色谱层析[四氯化碳-丙酮（2:1~1:1）→四氯化碳-甲醇-水（5:1:0.1~1:1:0.1）]及ODS柱色谱层析[甲醇-水（10:90，60:40，100:0）]，得到化合物4（15.0 mg）。
Fr.5经硅胶柱色谱层析[四氯化碳：甲醇（10:1~1:1）]得到4个组分（Fr.5-1~Fr.5-4）。其中Fr.5-2经硅胶柱色谱层析[四氯化碳：甲醇（9:1~1:1）→四氯化碳：甲醇：水（9:1:0.1~1:1:0.1）]及ODS柱色谱层析[甲醇:水（10:90，60:40，100:0）]，得到化合物1（16.0 mg）；Fr.5-3通过硅胶柱色谱层析[四氯化碳：甲醇（9:1~1:1）→四氯化碳：甲醇：水（9:1:0.1~1:1:0.1）]及反相中压制备液相色谱（甲醇-乙酸/水），得到化合物2（18.0 mg）与化合物3（11.0 mg）。
3 结构鉴定 3.1 化合物1黄色结晶性粉末（甲醇），三氯化铁-氰化钾反应呈阳性。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δH：7.65（1H，d，15.6 Hz，H-7′），7.08（1H，dd，6.8，1.6 Hz，H6'），6.32（1H，d，16.0 Hz，H-8′），5.39（1H，ddd，11.2，9.6，4.8 Hz，H-5），4.23（1H，brs，H-3），3.93（3H，s，OCH3），3.82（3H，s，OCH3），3.70（1H，dd，9.6，4.0 Hz，H-4），2.32（1H，dt，12.8，4.8 Hz，H-6a），2.24（1H，brd，14.8，2.8 Hz，H-2a），2.09（1H，dd，14.8，3.2 Hz，H-2b）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δC：174.1（C-7），167.5（C-9′），148.1（C-4′），146.8（C-3′），145.7（C-7′），126.8（C-1′），123.2（C-6′），115.0（C-8′），114.7（C-5′），109.4（C-2′），75.7（C-1），74.1（C-3），70.9（C-4），70.7（C-5），55.9（OCH），38.8（C-6），36.9（C-2）。其1H-NMR谱、13C-NMR谱与文献数据对照[10]，鉴定该化合物为3-O-阿魏酰基奎宁酸甲酯（3-O-ferulylquinic acid methyl ester）。
3.2 化合物2白色无定形粉末。紫外灯254 nm下显紫红色荧光，5%硫酸-乙醇溶液加热显黄色。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δH：7.65（1H，d，16.0 Hz，H-7′），7.19（1H，brs，H-2′），7.07（1H，brd，8.0 Hz，H-6′），6.81（1H，d，8.0 Hz，H-5′），6.40（1H，d，16.0 Hz，H-8′），5.36（1H，brd，3.2 Hz，H-2b），4.16（1H，dt，9.2，4.4 Hz，H-4），3.90（3H，s，OCH3），3.65（1H，dd，8.4，2.8 Hz，H-3）。其1H-NMR谱与文献数据对照[11]，鉴定该化合物为3-O-阿魏酰基奎宁酸（3-O-ferulylquinic acid）。
3.3 化合物3白色无定形粉末。紫外灯254 nm下显紫红色荧光，5%硫酸-乙醇溶液加热显黄色。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δH：7.63（1H，d，16.0 Hz，H-7′），7.07（1H，brs，H-2′），6.97（1H，brd，8.0 Hz，H-6′），6.78（1H，d，8.0 Hz，H-5′），6.36（1H，d，16.0 Hz，H-8′），4.82（1H，m，H-4），4.29（1H，brd，4.4 Hz，H-3），4.25（1H，m，H-5），3.75（3H，s，OCH3），2.19（1H，dt，10.0，3.2 Hz，H-6）。其1H-NMR谱与文献数据对照[12]，鉴定该化合物为4-O-阿魏酰基奎宁酸（4-O-ferulylquinic acid）。
化合物4~19经过薄层色谱、HPLC、理化鉴别，以及1H-NMR和13C-NMR波谱分析，分别鉴定为二氢咖啡酸[13]（4）、二氢咖啡酸正丁酯[14]（5）、二氢咖啡酸乙酯[15]（6）、二氢咖啡酸甲酯[12]（7）、咖啡酸[15]（8）、3，5-二甲氧基-4-羟基-苯甲酸乙酯[16]（9）、香草醛[17]（10）、1′-O-香草醛酰基-β-D-葡萄糖苷[18]（11）、5，7-dihydroxy-2-（4hydroxy phenyl）-4H-1-benzopyran-4-one[19]（12）、2-（3，4-dihydroxy phenyl）-5，7-dihydroxy-chromen-4-one[20]（13）、5α，8α-环外二氧麦角甾-6，22-二烯-3β-醇[21]（14）、β-谷甾醇（15）、β-胡萝卜苷（16）、1-亚油酸单甘油酯[22]（17）、亚油酸[23]（18）和棕榈酸[24]（19）。
4 结论本研究采用色谱法和波谱法对蒙药蒙古鸦葱95%乙醇提取物的化学成分进行了研究，从中分离得到19个单体化合物。其中包括了3个奎宁酸衍生物类（化合物1~3），8个酚酸类（化合物4~11），2个黄酮类（化合物12~13），3个甾体（化合物14~16），及3个脂肪酸（化合物17~19）。其中化合物1~3为首次从该属植物中分离得到。
5 讨论蒙古鸦葱为内蒙古民间传统用药，资源丰富，临床上可用于治疗毒疮、乳痈、跌打损伤等[1]。具有药理活性的酚酸类化合物的分离研究较少。其药理作用物质基础和作用机制研究较少，尚未能充分发掘其功效用途，本研究对蒙古鸦葱的化学成分进行了研究，为该植物后期活性成分筛选提供了理论依据，同时为蒙古鸦葱的进一步开发和利用提供了坚实的物质基础。
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