单纯性肥胖是以能量失衡、代谢紊乱、脂肪量冗余和慢性低度炎症为特征的一类代谢性疾病^[1]，与消化、神经和内分泌系统相关。本病受遗传、环境、经济等因素影响^[2]，病因多为过量饮食、机体能量代谢异常。肥胖可诱发多种慢性疾病^[3]，据数据统计在全球约400万例高身体质量指数（BMI）死亡者中，超2/3是由高BMI诱发的心血管疾病所致^[4-5]。目前治疗本病西医多以脂肪酶抑制剂等药物、胃切除手术治疗为主，中医多以中药、针灸、推拿、拔罐为主。腹部推拿作为中医推拿学的重要分支之一，可以调整神经递质的浓度，减少神经的炎症及应激反应，调节神经系统的基因蛋白活性及功能^[6]，改善单纯性肥胖的症状，疗效显著且安全性高。

肽YY（PYY）与胰高血糖素样肽-1（GLP-1）不仅是重要的肠道能量平衡调控激素，也是肠道内源性饱腹激素，是肠-脑轴信息交流的关键，两者可协同短链脂肪酸影响食物摄入和厌食行为，调控机体代谢，参与免疫功能的调节^[7]。当PYY和GLP-1表达过低，则胃排空加速，抑制胰岛素合成，产生饥饿感，使摄食量增加，诱发肥胖。临床中腹部推拿可以有效地改善胃肠道功能，治疗单纯性肥胖^[8]，但其作用机制有待深入研究。本实验选用高脂饮食诱导肥胖大鼠为模型，研究腹部推拿对单纯性肥胖大鼠模型摄食及结肠PYY与GLP-1表达影响，以期为腹部推拿防治肥胖提供依据。

1 材料与方法 1.1 实验动物

选用24只6~8周SPF级SD雄性大鼠，体质量在200 g左右，由斯贝福（北京）生物技术有限公司供应，动物实验合格证：SCXK（京）2019-0010。饲养于天津市南开医院实验动物平台清洁级动物房，室温为（25±2）℃，相对湿度为30%~40%，明暗周期12 h，适应性喂养7天，自由饮食。依随机法、对照法进行实验研究，按随机数字表法将24只雄鼠随机分为空白组、模型组、推拿组，每组各8只。本研究严以恪守《关于善待实验动物的指导性意见》，且经天津中医药大学实验动物伦理委员会审理批准（批准号：TCM-LAEC2023176）。

1.2 主要仪器与试剂

大鼠PYY试剂盒：Gelatins；大鼠GLP-1试剂盒：Gelatins；HF151（UV）CO₂培养箱：上海力申科学仪器有限公司；AB Sciex Qtrap 5500高灵敏质谱仪：AB Sciex；TYXH-I漩涡振荡器：上海汗诺仪器有限公司；Nexera UHPLC LC-30A高效液相色谱仪：日本岛津；TGL-16MS台式高速冷冻离心机：上海卢湘仪离心机仪器有限公司；ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱：Waters；甲醇、甲酸、乙腈：Fisher；3-硝基苯肼盐酸盐：Sigma；N-（3-二甲基氨基丙基）-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐、吡啶：aladdin。

1.3 造模方法

模型组、推拿组大鼠予以自制高脂饲料（饲料配比：50%的普通饲料，12%的猪油，10%的奶粉，豆粉、蛋黄粉、花生、蔗糖、干酪素各5%，2%的食盐，1%的麻油，10滴Vitamin AD^[9]），制备单纯性肥胖大鼠模型；空白组大鼠予以普通饲料。定期称重，若模型组、推拿组大鼠的体质量均超过空白组大鼠体质量的20%，则造模成功^[10-11]。

1.4 干预方法

实验前应用YF-3手法测定仪采集分析王金贵教授推拿手法的信息，建立大鼠推拿手法库。施术者使用推拿手法模拟仪（专利号：ZL200710187403.1）对本研究推拿手法的施力度、频率等进行训练，施术者通过手法测定仪检测合格后方可参与干预。以达到腹部摩法（3N，20~ 30圈/min）、腹部推法（5N，15~20次/min）为合格判定标准。

1.4.1 推拿组

抓取实验大鼠取仰卧位。

1）摩中脘穴：术者持按摩推拿手法模拟仪按摩头着力于治疗部位，保持顺时针方向，通过肩关节在前外方向的小幅度环转，使着力面在治疗部位做有节奏的环形平移摩擦，保持动作的灵活性与轻快性，中等速度，应避免引起皮下组织运动，如此反复操作12 min。

2）推任脉法：术者持按摩推拿手法模拟仪按摩头紧贴治疗部位，由胸骨剑突下朝尾部进行单方向的直线推按，缓慢加力，平稳施力，如此反复操作8 min。

以上操作1次/d，20 min/次，共治疗14 d，中间休息1 d。上述穴位定位参照《实验推拿学》^[12]与《中国兽医针灸学》^[13]。

1.4.2 模型组

实验大鼠每日抓取，仰卧位束缚，不予腹部推拿治疗，参与实验室结果检测。束缚每日1次，20 min/次，共束缚14 d。

1.4.3 空白组

实验大鼠不予任何手段干预，仅参与实验室结果检测。

1.5 观察指标及检测方法 1.5.1 大鼠生理学指标检测

1）摄食量：于上午9：00检测大鼠摄食量（每日将固定称好的食物放置于大鼠喂食网上，24 h后，去除木屑、大鼠排泄物等杂物将剩余的食物称质量，以此计算大鼠每日的摄食量）。2）生理指标检测：结束第14次治疗后，测量大鼠体质量、体长，计算Lee’s指数：1/3[体质量（g）×1 000]÷体长、腹腔内脂肪系数（%）：（脂肪质量/体质量）×100%、肝体体比：肝质量/体质量。

脂肪称质量方法：体质量检测结束后，过量乙醚麻醉处死大鼠，迅速打开腹腔，将肝脏及后腹腔、肾脏周围等处脂肪取出，冲洗滤干后于电子天平上称质量。

1.5.2 组织样品制备切片

取结肠组织样本于4%多聚甲醛里固定24 h；流水冲洗；梯度乙醇脱水（50%、70%、85%、95%、100%）；组织先后于无水乙醇和二甲苯各半的混合液、纯二甲苯中浸渍透明；浸蜡与包埋；载玻片多聚赖氨酸包被；切片（设定5 μm厚度）；贴片，45 ℃温箱中烤片干燥。

1.5.3 结肠GLP-1、PYY表达测定

采取酶联免疫吸附法，对裂解后的大鼠结肠黏膜组织进行检测，试剂盒设置好标准品孔和样本孔，各加不同浓度的标准品和样本（50 μL）；加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体（100 μL）；恒温箱（37 ℃）温育60 min；洗板（5次）：洗涤液（350 μL），静置1 min，拍干；避光孵育（37 ℃）15 min；加入终止液50 μL，测定OD值。

1.5.4 结肠组织形态结构测定

取结肠组织样品二甲苯中浸泡脱蜡10 min（重复2次）水化：梯度乙醇浸泡30~60 s；PBS清洗5 min（重复2次）；苏木素染色2 min，自来水冲洗；盐酸乙醇分化3次，每次2 s，自来水冲洗；1%伊红（醇溶性）10~15 s（示伊红颜色而定）复染；梯度乙醇浸泡脱水30~60 s；二甲苯中浸泡透明10 min（重复2次）。封片后用倒置显微镜和全景扫描仪进行观察并拍照。

1.6 统计学处理

数据用SPSS 22.0软件进行数据分析，所有数据均采用平均值±标准差（x±s）来表示。先用正态性检验（Normality and Lognormality Tests）对数据进行正态检验分析，数据服从于正态分布，则对组内数据分析选用t检验，对组间数据分析选用单因素方差分析（One-way ANOVA），不满足正态检验的数据，采用克鲁斯卡尔-沃利斯检验（Kruskal-Wallis test）分析，以P＜0.01，P＜0.05表示两组数据差异具有统计学意义。

2 结果 2.1 各组大鼠体质量及摄食量的比较 2.1.1 体质量

对单纯性肥胖模型大鼠造模前后的体质量进行比较，模型组和推拿组大鼠造模后体质量均较造模前明显增加（P＜0.01），见表 1。对各组大鼠干预前的体质量进行比较，与空白组相比，模型组和推拿组大鼠体质量均明显增加（P＜0.01）；与模型组相比，推拿组大鼠体质量差异不具有统计学意义（P＞0.05），提示两组数据有可比性，实验结果具有可靠性，见表 2。以上提示单纯性肥胖模型大鼠造模成功。

对单纯肥胖模型大鼠干预前后的体质量进行组内比较，模型组大鼠体质量差异无统计学意义（P＞0.05），推拿组大鼠体质量明显下降（P＜0.01），见表 3。

2.1.2 摄食量

对单纯肥胖模型大鼠干预前后的摄食量进行组内比较，模型组大鼠摄食量差异不具统计学意义（P＞0.05），推拿组大鼠摄食量明显下降（P＜0.01），见表 4。

2.2 各组大鼠lee’s指数、脂肪系数和肝脏体比的比较

lee’s指数与空白组相比，模型组大鼠明显升高（P＜0.05），推拿组差异无统计学意义（P＞0.05）。腹腔内脂肪系数与空白组相比，模型组、推拿组大鼠显著升高（P＜0.01）；与模型组相比，推拿组明显降低（P＜0.01）。肝脏体比各组之间相比差异均不具有统计学意义（P＞0.05），见表 5。

2.3 腹部推拿对肥胖大鼠结肠组织中PYY、GLP-1表达的影响

PYY表达与空白组相比，模型组、推拿组皆显著降低（P＜0.01）；与模型组相比，推拿组显著升高（P＜0.01）。GLP-1表达与空白组相比，模型组、推拿组皆显著降低（P＜0.01）；与模型组相比，推拿组显著升高（P＜0.01），见表 6（因取材，检测中组织的消耗，PYY、GLP-1表达的检测数量为6只）。

2.4 各组大鼠结肠组织形态结构的比较

镜下（50 μm）显示，空白组大鼠结肠组织黏膜表层结构完整，固有层腺体结构排列整齐，杯状细胞数量正常；模型组大鼠显示其结肠黏膜表层有损伤，下层腺体结构出现异样分支并显不规整，隐窝呈现萎缩和变形现象，排列混乱，杯状细胞数量降低，存在慢性炎症细胞的浸润；与模型组比较，推拿组可见大鼠其结肠组织保持了上皮层的完整性，腺体结构排列整齐，杯状细胞的数量亦保持在正常范围内，炎性浸润情况得到减轻，见图 1。

3 讨论

随着社会的不断发展，人们生活方式、饮食结构发生巨大变化，肥胖人口数量持续增加。对195个国家数据的分析显示，自1980年以来，70多个国家的肥胖率翻倍上涨，2015年超过6亿成年人肥胖，且高BMI导致全球400万人死亡^{[5, 14]}。西医认为肥胖病因主要责于能量代谢的不平衡以及运动量的缺乏。中医学认为肥胖病位主要责之于脾胃，与肺、肝、肾关系密切，病机关键在于“痰湿”，饮食不节为主要原因。本课题在治疗本病上，于腹部施术选穴，既符合中医学在经络穴位学说上对本病的理解，又与现代解剖学相应。“摩中脘”以健脾理气，祛湿化浊；“推任脉”以整体调节全身气机。中脘穴即胃脘的中部，胃之募穴，又有多条经脉（小肠经、肺经、脾经、胃经、肝经）的循行与胃而合，选取本穴可联系多个脏腑共同作用，调理气血津液的正常运行，化脂降浊。顺时针的方向行摩法，激发大肠的传导力，将废物顺应大肠的走向排出，因肠道对外界刺激的敏感性较强，此摩法能更好的通利肠腑而化痰湿^[15]。任脉居人体前正中线上，多个穴位为调气要穴，通过推任脉能更好的疏理经脉气机，起到健脾扶正、和中补虚、消散积滞的作用。

实验结果可见，高脂饮食（HFD）诱导的单纯性肥胖大鼠肠道PYY、GLP-1表达下调，摄食量、体质量、Lee’s指数指数、脂肪系数明显增加，同时肠组织上皮生理结构紊乱，炎性细胞浸润，隐窝呈现萎缩和变形，表明不同的饮食可导致生物体由内而外的整体情况的变化。经腹部推拿干预后，单纯性肥胖大鼠肠道PYY、GLP-1表达明显改善，其摄食量、体质量、脂肪系数有效降低，同时结肠组织上皮结构缺损程度、腺体紊乱程度及炎性细胞浸润程度明显减轻，隐窝结构改变明显缓解。

本次实验证实了腹部推拿疗法能有效改善脂肪沉积状态，可能与其改善PYY、GLP-1的表达，激发厌食系统，调整能量的摄入，使能量产生负差，从而达到减肥的效果，并且对肠道形态的改善具有积极意义。同时本研究在实验中存在许多不足，以至于部分实验数据结果缺乏显著性，作者认为可能与实验对象样本量较小，干预疗程较短。同时本实验在研究亦存在一定局限性：1）本研究纳入的大鼠均为雄性大鼠，雌性大鼠的观测数据缺失，可在实验结论上造成一定偏差，因此今后可以做相应的实验研究，以证明性别的差异是否影响疗效。2）本次研究疗法只采用了腹部推拿疗法的两个手法措施，对于其他手法措施是否具有相当或者更好的疗效可以进一步研究。