苏葶丸收录于2022年公布的《古代经典名方目录（第二批儿科部分）》^[1]，源自《医宗金鉴》（清·吴谦），全称苏葶定喘丸，功效为泻饮降逆，主治小儿饮停上焦攻肺，喘急不得卧^[2]。其组成为紫苏子、葶苈子和大枣，紫苏子和葶苈子配伍，一寒一温，可增强降气化痰平喘之功。临床上将苏葶丸与其他方剂联合使用，用于治疗心脑血管、呼吸系统等疾病^[3-5]。

目前，对苏葶丸的研究多集中在临床应用方面，对其质量控制的研究极少。虽然报道苏葶丸的研究并不多，但其作为广为流传的儿科经典名方，疗效确切，完善其质量控制方法，具有重要的价值。本研究采用薄层色谱法（TLC）对炒紫苏子和炒葶苈子进行定性鉴别，建立苏葶丸的指纹图谱，同时测定样品中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷（QGG）、迷迭香酸2种成分的含量，以期建立苏葶丸的质量控制方法。

1 仪器与材料 1.1 仪器

Agilent 1260高效液相色谱仪，美国Agilent公司；XP205型十万分之一电子分析天平，瑞士METTLER TOLEDO公司；AX224ZH型万分之一天平，奥豪斯仪器（常州）有限公司；YP5001N型电子天平，上海箐海仪器有限公司；ZDHW型电热套，北京中兴伟业仪器有限公司；DLSB-5/25型低温冷却循环泵，天津科普仪器设备有限公司；Milli-Q academic超纯水系统，美国Miliipore公司；1000C型多功能粉碎机，永康市红太阳机电有限公司。

1.2 试剂及药材

甲醇、乙腈均为色谱纯，美国Fisher公司；去离子水由Milli-Q超纯水机制备；磷酸，色谱纯，Acid 85%，赛默飞世尔科技有限公司；QGG（批号：111854-201905，纯度94.5%），购自中国食品药品检定研究院；迷迭香酸（批号：A20IB223325，纯度98.2%），购自上海源叶生物科技有限公司；紫苏子对照药材（批号：121614-201803），购自中国食品药品检定研究院。

炒葶苈子、炒紫苏子、大枣均购于其道地产地或主产区，对药材进行鉴定，均符合《中国药典》2020版项下规定：炒葶苈子为十字花科植物播娘蒿Descurainia sophia（L.）Webb. ex Prantl的干燥成熟种子照清炒法（通则0213）炮制而成；炒紫苏子为唇形科植物紫苏Perilla frutescens（L.）Britt.的干燥成熟果实照清炒法（通则0213）炮制而成；大枣为鼠李科植物枣Ziziphus jujuba Mill.的干燥成熟果实；各批次药材的产地及批号信息如表 1所示。

2 方法与结果 2.1 苏葶丸的制备

苏葶丸原文制法记载“南苏子（炒）、苦葶苈子（微炒）各等分。以上为细末，蒸枣肉为丸，如麻子大。每服五丸至七丸，淡姜汤下。”查阅文献资料，确定苏葶丸为3~4 mm的丸剂^[6]。根据3味饮片的编号，采用随机数表法组合制备将各味药的不同批次饮片随机组合得到10批苏葶丸样品并编号，组合具体信息见表 2。分别取各批炒紫苏子和炒葶苈子粉碎，其中炒紫苏子粉过药典筛2号筛，炒葶苈子粉过药典筛4号筛，大枣去核后蒸制枣泥；取等量炒紫苏子粉和炒葶苈子粉，按总药粉量与枣泥量比例为1∶0.45混匀，用搓丸板制成3 mm的丸剂，得到10批苏葶丸，编号依次为S1-S10，于干燥器内保存。

2.2 薄层色谱鉴别 2.2.1 炒紫苏子

取苏葶丸适量，研碎，称取粉末3 g，加甲醇25 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取紫苏子对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。另取处方中不含炒紫苏子的其他药材，按本品制法及上述供试品制备方法制成阴性样品溶液。照TLC（通则0502）试验^[7]，吸取上述两种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-甲苯-乙酸乙酯-甲酸（2∶5∶2.5∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果供试品溶液色谱中，在与对照药材色谱相应位置显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰。见图 1。

2.2.2 炒葶苈子

取苏葶丸适量，研碎，称取粉末3 g，加70%甲醇20 mL，加热回流1 h，滤过，取滤液作为供试品溶液。取QGG对照品，加30%甲醇制成每1 mL含80 μg的溶液，作为对照品溶液。另取处方中不含炒葶苈子的其他药材，按本品制法及上述供试品制备方法制成阴性样品溶液。照TLC（通则0502）试验^[7]，吸取上述两种溶液各2 μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以丙酮-水-冰乙酸（2∶5∶0.25）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果供试品溶液色谱中，在与对照品色谱相应位置显相同的黄色荧光斑点，且阴性对照无干扰。见图 2。

2.3 色谱条件

InfinttyLab Poroshell 120 EC-C₁₈色谱柱（4.6 mm×150 mm，4 μm），进样量为8 μL，柱温30 ℃，流速为0.8 mL/min，流动相为0.1%磷酸水（A）-乙腈（B），梯度洗脱（0~6 min，7%~9%B；6~30 min，9%~43%B；30~32 min，43%~90%B；32~40 min，90%B），检测波长分别为指纹图谱254 nm，含量测定中QGG 254 nm、迷迭香酸320 nm。

2.4 指纹图谱研究 2.4.1 溶液的制备 2.4.1.1 混合对照品溶液的制备

精密称取QGG、迷迭香酸对照品适量，分别置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，分别制成每1 mL含411.075 μg QGG、813.096 μg迷迭香酸的对照品溶液，分别精密量取上述对照品溶液适量，置于10 mL容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含32.886 μg QGG、162.619 μg迷迭香酸的混合对照品溶液。

2.4.1.2 供试品溶液的制备

取苏葶丸适量，研碎，精密称取粉末0.6 g于100 mL圆底烧瓶中，精密加入25 mL 50%甲醇，称定质量，回流提取60 min，取出于室温放冷后补足失重，摇匀，静置，取上清液过0.22 μm有机微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.4.1.3 单味药材样品溶液的制备

按苏葶丸中药材比例折算，分别取苏葶丸中3味药材粉末，分别按“2.4.2”项下供试品溶液制备方法制备，即得。

2.4.2 精密度考察

取苏葶丸样品S1，按“2.4.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件连续进样6次，记录HPLC图，以QGG为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间、相对峰面积及其RSD。结果显示，各共有峰相对保留时间的RSD均小于0.2%，相对峰面积的RSD均小于2.0%，表明仪器精密度良好。

2.4.3 稳定性考察

取苏葶丸样品S1，按“2.4.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件，分别于0 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h进样，记录HPLC图，以QGG为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间、相对峰面积及其RSD。结果显示，各共有峰相对保留时间的RSD均小于0.3%，相对峰面积的RSD均小于3.0%，表明供试品溶液在48 h内稳定性良好。

2.4.4 重复性考察

取苏葶丸样品S1，按“2.4.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件测定，记录HPLC图，以QGG为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间、相对峰面积及其RSD。结果显示，各共有峰相对保留时间的RSD均小于0.2%，相对峰面积的RSD均小于2.0%，表明该方法的重复性良好。

2.4.5 指纹图谱建立与相似度评价

采用“2.4.1.2”项下方法分别制备10批苏葶丸的供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件测定，记录HPLC图。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”（2012版）进行数据分析，以样品S1图谱为参照图谱，采用中位数法，时间窗宽度为0.1，进行多点校正和Mark峰匹配，生成苏葶丸的对照指纹图谱，见图 3，共标定7个共有峰，与对照品图谱比对，指认其中2个色谱峰，分别是2号峰QGG、6号峰迷迭香酸。匹配后的10批样品色谱图见图 4，以对照指纹图谱为基准，进行各样品相似度评价，10批苏葶丸指纹图谱相似度分别为0.973、0.989、0.988、0.983、0.991、0.989、0.986、0.969、0.968、0.986。

2.4.6 色谱峰药材归属

取“2.4.1”项下混合对照品溶液、供试品溶液、单味药材样品溶液，按“2.3”项下色谱条件分别进样分析，记录色谱图，确定指纹图谱中各共有峰的药味归属，具体见图 5。峰1、峰2（QGG）、峰3、峰4、峰7为炒葶苈子色谱峰，峰5、峰6（迷迭香酸）为炒紫苏子色谱峰。

2.5 多指标成分含量测定 2.5.1 溶液的制备 2.5.1.1 混合对照品溶液的制备

同指纹图谱“2.4.1.1”项下混合对照品溶液的制备。

2.5.1.2 供试品溶液的制备

同指纹图谱“2.4.1.2”项下供试品溶液的制备。

2.5.1.3 阴性样品溶液的制备

按苏葶丸中药材比例折算，分别制备缺炒葶苈子、缺炒紫苏子、缺大枣的阴性样品，分别按指纹图谱“2.4.1.2”项下供试品溶液制备方法制备，即得。

2.5.2 专属性考察

分别吸取“2.5.1”项下混合对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液，按“2.3”项下色谱条件进样分析，记录色谱图。结果表明，阴性样品溶液在指标性成分出峰处无干扰，说明该方法专属性良好。

2.5.3 线性关系考察

分别精密称取对照品QGG、迷迭香酸适量，加甲醇超声溶解并定容，制成每1 mL含QGG 103.194 μg、迷迭香酸469.396 μg的溶液为母液备用。吸取QGG母液，加50%甲醇稀释成浓度分别为1.032、5.160、20.639、41.278、51.146 μg/mL的QGG对照品线性溶液；吸取迷迭香酸母液，加50%甲醇稀释成浓度分别为23.470、46.940、93.879、117.349、187.758 μg/mL的迷迭香酸对照品线性溶液。按“2.3”项下色谱条件进样分析，并以浓度（μg/mL）为横坐标（X），峰面积A（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，结果见表 3。从表 3中可以看出，QGG在1.032~51.146 μg/mL范围内、迷迭香酸在23.470~187.758 μg/mL范围内线性关系良好。

2.5.4 精密度考察

精密吸取浓度为32.886 μg/mL QGG和162.619 μg/mL迷迭香酸的混合对照品溶液10 μL，按“2.3”项下色谱条件连续进样6次，记录指标成分峰面积，计算RSD，结果QGG和迷迭香酸峰面积的RSD分别为0.70%、0.09%，表明仪器的精密度良好。

2.5.5 稳定性考察

取苏葶丸样品S1，按“2.4.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件，分别于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、24 h、48 h进样，记录指标成分峰面积，并计算RSD，结果QGG和迷迭香酸峰面积的RSD分别为1.80%、0.39%，表明供试品溶液在48 h内稳定性良好。

2.5.6 重复性考察

取苏葶丸样品S1，按“2.4.1.2”项下方法平行制备供试品溶液（共6份），按2.3”项下色谱条件连续测定，记录指标成分峰面积，并计算含量RSD，结果QGG和迷迭香酸含量的RSD分别为1.52%、1.94%，结果表明该方法的重复性良好。

2.5.7 加样回收率考察

称取已知指标成分含量的苏葶丸（样品S1）0.3 g，精密称定，平行6份，精密加入适量的QGG和迷迭香酸对照品溶液，按“2.4.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件测定，并计算加样回收率。结果QGG和迷迭香酸的加样回收率分别为99.50%~101.33%、94.73%~97.22%，RSD分别为1.30%、0.96%，结果表明该方法准确度良好。

2.5.8 样品的含量测定

取10批苏葶丸样品，分别按“2.4.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件测定，见图 6。计算样品中QGG和迷迭香酸的含量，结果见表 4。10批样品QGG和迷迭香酸的平均质量分数分别为0.201 mg/g，1.443 mg/g，样品S1、S8、S9中QGG含量较高，其药材均来源于湖南，由此可知产于湖南的葶苈子中QGG含量较产于河北的高。

3 讨论 3.1 TLC条件选择

炒葶苈子：曾按2020年版《中国药典（一部）》收载方法展开剂选用乙酸乙酯-甲醇-水（7∶2∶1），预实验结果显示，供试品溶液色谱与对照品色谱的荧光斑点Rf值不一致。后续将展开剂换为丙酮-水-冰乙酸（2∶5∶0.25），结果显示供试品溶液色谱中，在与对照品色谱相应位置显相同的黄色荧光斑点。

3.2 供试品溶液制备方法考察

本研究考察了不同取样量（0.4、0.5、0.6、0.7 g），不同提取溶剂（甲醇、水），不同浓度的甲醇（30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇），不同提取方式（超声、回流）及不同提取时间（30、60、90、120 min）制备的供试品溶液，采用HPLC，对样品的数量、峰形、分离度和被测成分的含量进行比较研究。结果表明在取样量为0.6 g采用50%甲醇、回流提取60 min时色谱峰较丰富，各色谱峰响应良好，指标成分提取率较高。

3.3 色谱条件考察

本实验考察了乙腈-0.1%醋酸水、乙腈-0.1%磷酸水两种溶剂系统。其中乙腈-0.1%磷酸水溶剂系统显示出良好的峰形和分离度，且基线平稳，因此选择乙腈-0.1%磷酸水为流动相。采用DAD检测器对供试品溶液进行全波长扫描，分析发现，在254 nm波长下，样品中的各个峰均表现出较高的响应值，而320 nm下迷迭香酸的峰形较好，吸收较大。综合考虑多个因素，如基线、峰形、峰数、分离度及指标成分响应值等，最终选择254 nm作为指纹图谱和QGG含量测定的检测波长，选择320 nm作为迷迭香酸含量测定的检测波长。

3.4 指标成分的选择

苏葶丸主要由葶苈子和紫苏子组成，葶苈子中黄酮类成分具有广泛的药理作用^[8-10]，而QGG含量最高^[11]，且仅存在于南葶苈子，同时也是《中国药典》2020版中葶苈子的含量测定指标成分。紫苏子的化学成分主要有酚酸、挥发油和黄酮类等，其中酚酸类中迷迭香酸含量最高，具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤等功效^[12-16]，同时也是《中国药典》2020版中紫苏子的含量测定指标成分。故本研究选择QGG和迷迭香酸作为苏葶丸质量控制的指标成分。

4 结语

为适应中医药理论体系下的产品多样性和便捷性，开发经典名方复方制剂是中医药新时期发展的客观需要，也是中医药走向规范化、现代化进程中不可或缺的一环。以经典名方为契机，对其产品的各个环节进行研究，并对其质量进行严格控制。故本研究从定性和定量两方面建立苏葶丸的质量控制方法，采用TLC定性鉴别了苏葶丸中炒紫苏子和炒葶苈子两味中药，建立了10批苏葶丸HPLC指纹图谱，其相似度高、分离度好，同时对部分共有峰进行了化学成分指认并进行定量分析，从而控制其质量，可为苏葶丸相关制剂研发提供依据。然而，本研究的定量分析指标较少，未来应筛选与药效相关的多个指标成分，建立同时测定多成分含量的方法，实现更精准的质量控制。此外，本研究的药材批次数量相对有限，来源可能不够广泛，未来可扩大样本量以更充分评估其稳定性和代表性。