舒肝宁注射液（Shuganning Injection）是以张仲景《伤寒论》中的名方“茵陈蒿汤”为基础方，依据该方随症加减而成的中药注射液^[1]，其主要成分包括茵陈提取物、栀子提取物、黄芩苷、板蓝根提取物和灵芝提取物^[2]，其主要成分如茵陈、栀子提取物等具有利湿退黄，黄芩苷具有清热解毒、保肝护肝、抗炎，灵芝提取物等具有益气扶正的功效，广泛用于各种肝脏疾病的治疗，如急慢性病毒性肝炎、药物性肝损伤、胆汁淤积性肝炎、肝硬化、慢性肝衰竭、脂肪性肝病等的治疗，在临床治疗方面发挥了重要作用^[3]。

临床使用中，多与注射用谷胱甘肽、异甘草酸镁注射液、多烯磷脂酰胆碱注射液等联合使用，协同发挥保肝护肝、抗炎、抗氧化和促进肝细胞再生等作用。舒肝宁注射液联合注射用谷胱甘肽进行治疗，能够促进肝功能进一步恢复，具有良好疗效^[4]。异甘草酸镁注射液加用舒肝宁注射液后显著提高急性肝炎患者的治疗效果，减轻氧化应激反应，降低白细胞介素-6（IL-6）、C反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平，加快肝功能恢复正常。舒肝宁注射液联合多烯磷脂酰胆碱注射液后，可以改善患者肝功能、调节脂代谢水平，降低炎症刺激，增强机体免疫力^[5]。随着对舒肝宁注射液配伍临床疗效评价的报道日趋增多，其临床用药合理性和安全性评价问题更为突出^[6]。

配伍稳定性研究是注射剂稳定性研究的主要内容^[7]。中药注射剂再评价工作方案中也明确要求“对稀释液种类、浓度及临床常用药品的配伍稳定性进行了研究，并将研究结果体现在药品说明书中”。在前期研究考察了舒肝宁注射液与0.9% 氯化钠注射液、5% 葡萄糖注射液等溶媒配伍稳定性基础上^[8]，本实验将舒肝宁注射液与上述3种注射液进行配伍，置于室温8 h考察其性状、pH、不溶性微粒，采用高效液相色谱法测定有效成分参考舒肝宁注射液执行标准：国家中成药标准汇编内科肝胆分册WS-10467（ZD-0467）-2002，确定以其主要原料：茵陈提取物、栀子提取物、板蓝根提取物、灵芝提取物、黄芩苷对应的含量测定方法进行检测，故选择绿原酸、栀子苷、黄芩苷和腺苷4种成分作为检测对象，，为提高舒肝宁注射液的稳定性和临床合理用药提供参考^[9]。

1 材料和方法 1.1 仪器与试剂 1.1.1 仪器

pH计（PB-10，Sartorius公司）、高效液相色谱仪（AgilentLC-1260美国安捷伦公司）、微粒分析仪（GWF-8JD，天津天河分析仪器有限公司）、渗透压测定仪（Osmopro310，英国YASN公司）、超纯水机（Milli-Q，Millipore公司）

1.1.2 药物及主要试剂

绿原酸（国家药品标准物质，含量96.3%，110753~202119，中国食品药品检定研究院）栀子苷（国家药品标准物质，含量98.1%，110749-202320，中国食品药品检定研究院）、黄芩苷（国家药品标准物质，含量97.2%，110715-202223，中国食品药品检定研究院）、腺苷（国家药品标准物质，含量99.4%，110879-202204，中国食品药品检定研究院）、舒肝宁注射液（批号20240202，贵州瑞和制药有限公司）、注射用谷胱甘肽（批号24230360，重庆药友制药有限责任公司）、异甘草酸镁注射液（批号230726104，正大天晴药业集团股份有限公司）、多烯磷脂酰胆碱注射液（批号11240203，成都天台山制药股份有限公司）、10% 葡萄糖注射液（250 mL，批号2401180505，石家庄四药有限公司）、5% 葡萄糖注射液（250 mL，批号2403053402，石家庄四药有限公司）、甲醇（美国Thermo Fisher，色谱纯）

1.2 实验方法 1.2.1 注射液配制方法

参照舒肝宁注射液和注射用谷胱甘肽、异甘草酸镁注射液、多烯磷脂酰胆碱注射液的说明书用法用量如表 1所示，分别将各种注射液稀释配制。

具体配制方法：舒肝宁注射液使用10% 葡萄糖注射液进行稀释，3种注射液分别按照使用说明用对应浓度的葡萄糖稀释，同时将两种注射液倒入洁净的500 mL具塞烧瓶中，使用洁净玻璃棒搅拌使其混合充分，即得配伍溶液，塞上塞子用封口膜封住。后在0、0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8 h分别测量pH值，渗透压摩尔浓度，不溶性微粒以及有效成分含量（绿原酸、栀子苷、黄芩苷、腺苷）。

1.2.2 pH值的测定

pH计使用pH 4.00、pH 6.68、pH 9.00标准液校准，参照《中国药典（2020版）》通则0631，分别测量配伍溶液pH，平行3次。

1.2.3 渗透压摩尔浓度的测定

渗透压测定仪校准后测量。参照《中国药典（2020版）》通则0632，分别测量配伍溶液渗透压，平行3次。

参考标准：正常人体血液的渗透压摩尔浓度范围为285~310 mOsmol/kg，0.9% 氯化钠溶液或5% 葡萄糖溶液的渗透压摩尔浓度与人体血液相当，5% 葡萄糖注射液的渗透压摩尔浓度应为250 mOsmol/kg左右，10% 葡萄糖注射液的渗透压摩尔浓度应为500 mOsmol/kg左右。

1.2.4 不溶性微粒的测定

在超净台将配伍好的注射液贴壁倾倒到带盖容器中（保证过程中不产生气泡），参照《中国药典（2020版）》通则0903第一法（光阻法）分别将上述称样容器放入仪器取样测定，一次吸取10 mL，平行测定4次，取样结束后，将盖子盖好，防止灰尘进入，按照药典要求去除第一次测量数据，计算平均值。

1.2.5 主要成分含量测定

参照高效液相色谱法（《中国药典（2020版）》通则0512），将样品溶液过0.22 µm水系膜后，使用HPLC对绿原酸、栀子苷、黄芩苷和腺苷进行含量测定。

1.2.5.1 对照品溶液的配制

绿原酸、栀子苷、黄芩苷对照品溶液制备：精密称取绿原酸6.43 mg、栀子苷5.19 mg、黄芩苷10.98 mg，用甲醇定容到10 mL容量瓶中得到储备液，分别取绿原酸储备液100 µL、栀子苷储备液1 mL、黄芩苷储备液1 mL加入到10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀即得对照品溶液。

腺苷对照品溶液制备：精密称取腺苷对照品6.28 mg，用甲醇定容到25 mL容量瓶中得到腺苷储备液，精密吸取1 mL上述溶液加入到10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，得到腺苷对照品溶液。

1.2.5.2 色谱条件

1）绿原酸、栀子苷、黄芩苷的测定色谱柱：Agilent Eclipse plus C₁₈柱5 µm，4.6× 150 µm；流动相：甲醇为A相，以0.4% 磷酸水为B相，检测波长：λ=327 nm，λ=238 nm；进样量：10 µL，按表 2方法进行梯度洗脱。2）腺苷的测定：色谱柱：AgilentEclipseplusC₁₈ 5 µm，4.6×150 µm；流动相：以甲醇为A相，以水为B相，检测波长：λ=260 nm；进样量：10 µL；按表 3方法进行梯度洗脱。

1.2.5.3 标准曲线的绘制

精密量取“1.2.5.2”项下对照品储备液配成系列不同浓度的溶液。按“1.2.5.1”项下色谱条件，记录峰面积。以对照品的浓度X（µg/mL）为横坐标，峰面积Y为纵坐标进行线性回归，得绿原酸、栀子苷、黄芩苷和腺苷的回归线方程。

1.2.5.4 精密度实验

按照“1.2.5.2”下绿原酸方法将黄芩苷、绿原酸、栀子苷和腺苷对照品使用同一高效液相色谱仪重复进样6次，测定峰面积，计算各成分的RSD值，评估仪器的精密度。

1.2.5.5 重复性实验

取同一批号样品，按“1.2.1”项下供试品溶液的制备方法平行制备6份供试品溶液，按“1.2.5.1”项下色谱条件分别进样测定分析，记录4种有效成分的含量，计算RSD值。

1.2.5.6 回收率实验

精密量取6份已知含量的样品250 µL（含绿原酸、栀子苷、黄芩苷、腺苷），分别精密加入对照溶液250 µL（含绿原酸、栀子苷、黄芩苷、腺苷），摇匀。制备成供试品溶液后按“1.2.5.1”项下色谱条件进样测定，记录结果，并计算回收率。

1.2.6 数据处理与稳定性判断

pH值、渗透压摩尔浓度、不溶性微粒测定结果以均数±标准差（x±s）表示（n=3）。指标成分含量以相对0 h含量的百分比（%）表示，并计算0~8 h内各指标成分含量的相对标准偏差（RSD）。参照《中国药典（2020年版）》及中药注射剂配伍稳定性研究相关指导原则、《中药注射剂安全性再评价基本技术要求》，当性状无明显变化、pH值变化幅度 < 1.0、不溶性微粒符合药典规定、渗透压摩尔浓度在安全范围内，且指标成分含量相对变化 < 10%、RSD < 5% 时，视为配伍后8 h内稳定、无显著变化。

2 实验结果 2.1 指标成分分析方法验证 2.1.1 专属性

对照品溶液中绿原酸、栀子苷、黄芩苷的色谱峰见图 1，样品溶液中绿原酸、栀子苷、黄芩苷的色谱峰见图 2，对照品溶液中腺苷色谱峰见图 3、样品溶液中腺苷色谱峰见图 4，其主峰分离度好，色谱条件良好，适用于绿原酸、栀子苷、黄芩苷和腺苷的测定。

2.1.2 线性关系考察

以对照品的浓度X（µg/mL）为横坐标、峰面积Y为纵坐标进行线性回归，得到绿原酸、栀子苷、黄芩苷和腺苷的回归线方程分别为y=18.502x-20.386（R²=0.998）、y=15.008x-0.4312（R²=1）、y=19.465x+3.483 3（R²=0.995）、y=32.661x- 4.236 8（R²=1），结果如图 5所示。结果表明四种成分在各自线性范围内呈良好的线性关系，线性范围分别为3.21~205.2、1.60~204.4、1.61~206.0和3.21~ 205.2 µg/mL。

2.1.3 精密度实验

以峰面积计算绿原酸、栀子苷、黄芩苷、腺苷含量，RSD分别为0.73%、1.20%、1.30%、1.25%，表明仪器精密度良好。

2.1.4 重复性

舒肝宁注射液与注射用谷胱甘肽配伍后，以峰面积计算绿原酸、栀子苷、黄芩苷、腺苷含量，RSD分别0.25%、0.07%、0.09%、1.24%；舒肝宁注射液与异甘草酸镁注射液配伍后，以峰面积计算绿原酸、栀子苷、黄芩苷、腺苷含量，RSD分别为0.37%、0.44%、0.39%、1.88%；舒肝宁注射液与多烯磷脂酰胆碱注射液配伍后，以峰面积计算绿原酸、栀子苷、黄芩苷、腺苷含量，RSD分别为0.36%、2.25%、0.45%、2.15%；结果符合规定，表明该方法重复性良好。

2.1.5 加样回收率

舒肝宁注射液与注射用谷胱甘肽配伍后，4种成分平均回收率分别为110.87%、108.23%、110.64%、102.31%，RSD分别为0.14%、0.03%、2.43%、0.07%；舒肝宁注射液与异甘草酸镁注射液配伍后，4种成分平均回收率分别为95.46%、109.22%、99.64%、103.02%，RSD分别为1.63%、2.58%、3.97%、2.42%；舒肝宁注射液与多烯磷脂酰胆碱注射液配伍后，4种成分平均回收率分别为103.91%、101.88%、103.79%、110.23%，RSD分别为0.78%、0.22%、1.73%、2.44%；回收率均在70%~120% 范围内，RSD均小于8%，符合药典规定，结果表明该方法回收率良好。

2.2 舒肝宁注射液与注射用谷胱甘肽配伍稳定性结果

舒肝宁注射液与注射用谷胱甘肽配伍后pH值、渗透压摩尔浓度、不溶性微粒以及含量的稳定性结果见表 4和图 6、7。

2.3 舒肝宁注射液与异甘草酸镁注射液配伍稳定性考察

舒肝宁注射液与异甘草酸镁注射液配伍后pH值、渗透压摩尔浓度、不溶性微粒以及含量的稳定性结果，见表 5和图 8、9。

2.4 舒肝宁注射液与多烯磷脂酰胆碱注射液配伍稳定性考察

舒肝宁注射液与多烯磷脂酰胆碱注射液配伍后pH、渗透压摩尔浓度、不溶性微粒以及含量的稳定性结果，见表 6和图 10、11。

3 讨论与结论 3.1 检测指标的选择

静脉滴注是临床药物治疗常见的给药途径，由于药物直接进入血液循环，相较于其他给药途径风险更高^[10]。尤其是静脉用中药注射剂，其成分复杂，当与不恰当溶媒或其他注射剂混合时，可发生理化性质的改变，例如，pH值的变化可通过影响药物有效成分的离子化状态和溶解度，导致弱酸/弱碱性成分的溶解平衡破坏，进而引发化学降解、沉淀生成、结晶或不溶性微粒增多等现象^[11]，最终降低药物稳定性与疗效，甚至诱发不良反应。如舒肝宁注射液与鱼精蛋白对肝功能受损或者肝脏疾病引起的急症有很好的疗效，但在临床工作中将两种注射液混合后，立刻出现白色浑浊物，存在配伍禁忌，不能序贯输注^[12]。所以在配置过程中需要对指标进行充分关注^[13]。

pH值：注射液的pH应尽量接近人体生理环境的pH，以减少对组织和血管的刺激，注射液的合理pH范围为4~9。舒肝宁注射液与3种临床常用保肝药配伍后体外相容性实验试验结果表明：0~8 h内各配伍液的外观均为棕黄色透明液体，各配伍液的pH值的变化相对稳定，都处于注射液合理范围内。

不溶性微粒：注射液配伍后不溶性微粒值的增加是物理稳定性和临床安全性的双重威胁，需通过处方设计、配伍验证及操作流程优化系统控制。根据中华人民共和国药典：2020版通则0903第一法中“结果判定”和配伍操作进行换算，舒肝宁注射液与3种注射液配伍后微粒数量均处于规定范围之内。

渗透压摩尔浓度：注射液的渗透压摩尔浓度改变可能影响药物的稳定性和安全性，正常血浆280~ 310 mOsm/kg，美国《静脉输液实践标准指南》建议渗透压小于600 mOsmol/kg的标准，超过此值风险显著增加。舒肝宁注射液与3种注射液配伍后的渗透压摩尔浓度在处于安全范围以内。

有效成分含量：注射液配伍后，有效成分含量的变化可能表明化学反应的发生和物理状态的改变，这些反应会导致药物活性降低，甚至生成有害物质，从而影响制剂的化学稳定性。本研究中，绿原酸、栀子苷、黄芩苷在8 h内的RSD均小于3%，表明稳定性良好；而腺苷的RSD大于10%，相对较高。这主要归因于腺苷在配伍液中的含量较低（约0.5 µg/mL），接近方法定量限，易受仪器测定变异（如基线噪声、进样精度）影响，导致相对标准偏差放大。但其绝对含量变化微小（< 0.1 µg/mL），且回收率实验显示腺苷平均回收率为102.31%~110.23%（RSD < 3%），证实方法可靠。参照《中国药典》（2020年版）通则9101，低浓度成分允许较高RSD（< 15%），不影响整体化学稳定性判断。因此，4种指标成分总体无显著变化，配伍后8 h内稳定。

临床使用时，在8 h内按照本实验的配伍方式使用舒肝宁注射液与3种药物，可在一定程度上保障用药安全，但仍需密切关注患者情况^[14]，及时地发现并处理患者出现的各种过敏反应；在首次用药后，需要对患者的体征和生理反应情况进行监测，治疗过程中也要严格掌握患者的适应证，增强用药的科学性^[15]。

3.2 配伍药物的选择

舒肝宁注射液常用于治疗各种肝病，多为联合用药，而不同的保肝药物对应的作用位点、作用机制存在差异^[16]。舒肝宁注射液，通过抗氧化应激、促进肝细胞修复等发挥作用；作用位点包括肝细胞膜、线粒体、胆红素转运体及炎症相关信号通路等。谷胱甘肽作为一种重要的抗氧化剂，通过直接中和毒素，增强解毒酶的活性等机制发挥作用，作用位点主要在细胞质内，两者联合使用可互补机制，提升保肝疗效，具有一定的临床推广应用价值^[17]；异甘草酸镁注射液主要通过抑制炎症介质的释放，促进肝细胞的增殖等机制发挥作用；作用位点包括肝脏组织、肝实质细胞、炎症通路中的关键信号分子等^[18]，两者均通过抗炎保肝机制改善肝病，但异甘草酸镁的作用更偏向于分子层面的抗炎、抗氧化及免疫调节^[19]。多烯磷脂酰胆碱直接作用于受损的肝细胞膜，靶点单一，集中在细胞膜层面，作用机制以结构修复为导向，两者联合运用可协同发挥抗肝炎的疗效^[20]。本试验进一步通过舒肝宁注射液配伍稳定性研究，观察药物配伍前后的物理化学变化，指导临床合理选择配伍药物和调整用药方案^[21]，为完善药品说明书，明确药品的配制方法和允许时限等相关内容，提供科学依据^[22]。

综上所述，舒肝宁与3种注射液配伍之后，pH值、渗透压摩尔浓度、不溶性微粒溶液、含量均较稳定，无明显变化，可配伍使用^[23]。